缓冲液是弱酸与其共轭碱、或者弱碱与其共轭酸的溶液。在分析化学应用中，如果样品包含酸性或碱性官能团，反相高效液相色谱(RP-HPLC)通常会使用缓冲液。这类缓冲液可减轻氢/水合氢和氢氧根离子的影响，从而降低pH波动。
基于缓冲类型、离子强度和pH正确选择缓冲液，是离子分析物RP-HPLC方法开发最关键的步骤。RP-HPLC中离子分析物的保留率主要受流动相pH影响。因此，RP-HPLC流动相pH控制是确保分析物有效分离最重要的参数之一。
二氧化硅类色谱柱反相分离常用pH值范围为2到8。此外，由于缓冲液在其pKa值下的pH控制效果佳，故其pKa必须接近所需的pH值。一般来说，最好选择 pKa 值小于所需流动相 pH 值 2 个单位的缓冲液。我们提供各种 pH 值范围的 HPLC 级缓冲液，可满足您实验室的所有色谱应用需求。
HPLC实验所用流动相添加剂（缓冲液、盐、酸和碱）及有机溶剂质量必须适合检测器灵敏度和洗脱方案。为实现理想的色谱分离效果，建议使用高质量溶剂和试剂。
必须根据色谱柱外壳材料和固定相性质选择缓冲液组成及流动相pH值，避免损坏色谱柱硬件和柱床。
缓冲液好溶于水且不会沉淀。将缓冲液与有机溶剂混合时，必须谨慎选择缓冲液浓度，避免因浓度过高而形成沉淀。否则可能造成泵运行问题，引起HPLC色谱柱堵塞。
与固定相相互作用弱的洗脱液今可从色谱柱上洗脱弱吸附分析物，而强相互作用洗脱液则可洗脱强吸附样品分子。不同溶剂的洗脱或溶剂强度主要取决于所用固定相的类型。除洗脱强度之外，缓冲液粘度和紫外线吸收率也对HPLC分析适用性存在重要影响。
