实验干货—ELISA实验显性淡、灵敏度低是为什么?怎么解决?
Elisa 实验以灵敏度较高、特异性较好的特点在临床上得到了广泛的应用，但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大，如不注意，有可能导致显色不全、花板等结果。
酶联免疫吸附实验
一、显色淡，灵敏度偏低
可能原因及解决方法：
试剂盒从2~8℃冰箱取出后打开盒盖，于室温平试剂盒未充分平衡衡至少20分钟，确保所有试剂已平衡至室温(约25℃)样品一般选择培养上清、血清、血浆。其他样品
2、样品不适合做ELISA检测形式可能不适合做ELISA检测或者需要优化检测的条件(例如稀释液的成分)
3、酶标板在贮存或洗后拍干时过分防止板过于干燥，干燥
4、包被抗体遭到破坏 操作温和，移液枪不能碰到孔底
5、样本和抗体孵育条件不合适，按照说明书条件，建议孵育过程中全程振荡孵育
6、洗涤浸泡时间过长，按照说明书操作，勿人为增加漫泡时间
7、偶联HRP试剂污染弃去试剂，重新配置
8、错误的稀释偶联HRP试剂弃去试剂，重新配置确定合适的孵育时间:人为判定-最高浓度的标准TMB底物孵育时间过短，因非人。
9、品出现深蓝色;S4-5有淡蓝色;机器判定620n为因素影响，需要优化孵育时间m波长下测定OD值达到0.6-0.65
10、样本浓度过高或存在基质效应建议做不同稀释倍数，确认样本最佳稀释倍数酶标仪滤光片设置有问题或者波
11、确认仪器设置及选择正确的波长检测长选择不对不能使用细胞培养板，建议使用ELISA专用高吸
12、酶标板不适合做ELISA附力板子
二、出现白板，阳性对照不显色
可能原因及解决方法：
1、显色液变质更换新的显色液
2、洗涤液配制有误请按说明书所示稀释倍数配制
3、未加酶结合物而认为已加入注意不要漏加
4、终止液误作洗涤液稀释或当底物液使用每次加液前均应看清标签请按照说明书所示配置说明书，注意
5、标准品稀释方法错误/或标准品有问题单位和稀释倍数，建议使用同批次试剂盒，不能混用不
6、不同试剂盒或不同批号的试剂混用，同试剂盒或不同批号的试剂
三、不正常的标准曲线
可能原因及解决方法：
1、错误的方法重悬标准品加入正确量的溶液重悬标准品，重悬充分
2、标准品稀释错误按照说明书要求稀释标准品
3、标准品污染用一次性的灭菌吸头，标准品贮存于2-8℃
4、错误的倍比稀释步骤按照说明书倍比稀释标准品TMB为底物和以OPD为底物的试剂盒均有使用，
5、波长选择错误而前者比色波长为450nm，后者为492nm。双波长比色分析优于单波长
6、标准品混用不同批号试剂勿混用
7、试剂盒在运输途中时间太尽量缩短运输时间，夏季应放冰块降温长，温度太高，标准品失ELISA未终止而直接检测4显色需终止后检测，否则会出现620nm比450nm读
8、50nm和620nm数高的现象。
四、OD值超出正常范围
可能原因及解决方法：
1、错误的样品或标准品的稀释按照说明书稀释
2、偶联抗体浓度过高按照说明书调整到最佳的浓度
3、TMB底物孵育时间过长调整到合适的孵育时间
4、样品或标准品污染避免污染
5、错误的孵育时间或温度按照说明书
6、孵育时未加盖导致溶液挥发和污染 贴封片或加盖
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