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2023/12/18 18:10:51纯化是大多数分子生物学实验中的常见程序,例如去除 PCR 反应中的短引物、未掺入的 dNTP、酶和盐以及其他杂质。纯化方法有多种,包括过滤、离心和分离。分离已成为生命科学中非常流行的方法,并使用各种类型的固相支持物。这包括琼脂糖珠、琼脂糖珠、二氧化硅珠和磁珠。使用磁珠分离是所有磁珠分离方法中最快、最干净且有效的技术。
磁珠可以涂有针对抗原、抗体、蛋白质或核酸的特异性亲和配体。将磁珠与样品一起孵育后,对磁珠(和附着的生物分子)施加磁力,以将磁珠收集成浓缩颗粒。分离完成后,可以轻松去除上清液,并且可以从磁珠上洗脱与珠子结合的生物分子。
使用磁力操纵磁珠的能力使得洗涤步骤比使用琼脂糖、琼脂糖凝胶或硅珠更容易和更快。纯化的产物还可以使用磁力分离方法以更浓缩的形式回收。
以下是给新用户的一些提示:
1. 重悬珠子
磁珠需要有足够的磁性含量,以便可以通过磁铁简单地下拉。传统磁珠的尺寸超过 1 µm (1 µm = 1000nm)。较新的珠子尺寸更小(低至数百纳米),以增加珠子表面积。这导致结合能力增加并改善分散性。磁珠是由氧化铁组成的重颗粒,因此它们会随着时间的推移而沉淀。珠子的尺寸越大,沉淀得越快。使用前涡旋并重悬磁珠非常重要,以重新分散磁珠并确保等分试样之间的一致性。
2. 清洗珠子
增加洗涤步骤的数量有助于减少与磁珠的非特异性结合。用乙醇(用于核酸纯化)或洗涤缓冲液洗涤磁珠时,请使用足够的洗涤溶液覆盖沉淀。
3. 了解珠子的特性
磁珠有不同的尺寸、形状、磁响应、涂层、缓冲条件和附着的官能团。这些变量影响珠子的特性。获取珠子的基本信息对于更好地了解如何处理它们非常重要。
4. 捕获珠子
一般来说,磁珠会被磁铁吸引并在一分钟内形成颗粒。延长磁珠对磁铁的吸引力,以确保所有磁珠均被回收。
5. 去除洗涤液时不要扰动珠粒
去除洗涤液或上清液时,倾斜移液器吸头,使吸头不接触磁珠沉淀。这可以防止珠子与上清液重新混合。使用具有倾斜侧面的磁力架,使珠粒集中在管壁的一侧。这使得去除上清液变得更加容易。