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台盼蓝染色液实验使用步骤

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2023/12/19 14:03:40

台盼蓝染液是细胞活性染料,常用于检测细胞膜的完整性。细胞损伤或死亡时,台盼蓝可穿透变性的细胞膜,与解体的DNA结合,使其着色。而活细胞能阻止染料进入细胞内。故可以检测细胞是否存活。

台盼蓝染色法的原理

正常的活细胞,胞膜结构完整,能够排斥台盼蓝,使之不能够进入胞内;而丧失活性或细胞膜不完整的细胞,胞膜的通透性增加,可被台盼蓝染成蓝色。通常认为细胞膜完整性丧失,即可认为细胞已经死亡,这与中性红作用相反。

因此,借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。台盼蓝是组织和细胞培养中常用的死细胞鉴定染色方法之一。  

注意凋亡小体也有台盼蓝拒染现象。台盼蓝染色后,通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数,就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。

实验步骤:
1. 用Hanks液配制0.1%台盼蓝溶液;
2. 用0.5%胰蛋白酶0.2%EDTA=1:1混合液来消化培养的贴壁细胞;
3. 再加入适量Hanks液制成细胞悬液;
4. 将待染色细胞稀释至所需浓度(方法及浓度范围与细胞计数相同);
5. 每0.1ml细胞悬液约加新鲜配制的染液一小滴,室温下染3—5min;
6. 染色过的细胞材料,取一滴细胞悬液置玻片上,加盖玻片后放高倍镜下观察;
7. 死亡的细胞着浅蓝色并膨大,无光泽。活细胞不着色并保持正常形态,有光泽;
8. 计数1000个细胞中的活细胞和死细胞数目;
9. 统计未染色细胞。可按公式计算出细胞活率。
细胞活率(%)=未染色的细胞数/观察的细胞总数×100。
MTT染色原理,与台盼蓝染色原理有类似之处
   活细胞中的某些物质(线粒体中的琥珀酸脱氢酶)能够和MTT反应,使MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒并沉积在细胞中,而死细胞没有此功能。DMSO(二甲基亚砜)能够将此结晶(蓝紫色甲瓒)溶解,在酶联免疫检测仪490nm波长处测定其吸光值,能够间接的反应活细胞的数量。一定范围内,蓝紫色结晶沉淀的数量与细胞数成正比。目前MTT法因其灵敏度高,经济快速等优势被广泛的运用于细胞毒性试验,肿瘤药物的筛选、放射敏感性测定和对某些生物活性因子的活性检测(原核真核蛋白表达)等方面。对细胞活力有影响的表达蛋白活性检测可以通过MTT比色法进行。


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