类器官技术攻克新领域丨逸漠生物iPSC诱导内耳类器官-化工仪器网-手机版

前言

内耳是听力系统的重要组成部分，负责感知听力和平衡功能，一旦损伤将会造成不可逆的危害。人多能干细胞经诱导分化为内耳类器官，在内耳模拟发育、基因治疗、建立疾病模型和药物筛选方面发挥重要作用，有利于对内耳发育和生理学的了解，能迅速推进对内耳相关疾病的治疗。

逸漠生物研制的Advanced-diff系列内耳类器官试剂盒能在体外短时间内诱导生成类器官，并且让成熟的内耳类器官具有神经胶质细胞环绕，大大缩短内耳类器官的培养时间，加速研究效率，推进对内耳类器官的探索。

Advanced-diff系列内耳类器官试剂盒是专用于诱导人多能干细胞分化为内耳类器官的培养试剂盒，包含了适合Advanced-diff系列内耳类器官生长的基础培养基、成熟培养基及诱导细胞分化所需的添加物，即买即用，不含动物源成分。

产品相关信息

产品优势

无动物源成分，操作简单，使用方便，诱导的内耳类器官能产生耳泡结构，在60天左右可观察到感觉毛细胞生成。

操作流程

分化第-2天

当人多能干细胞汇合度达到75%-80%左右开始诱导分化为内耳类器官，分化第-2天使用EB形成培养基诱导EB形成。分化第-1天，每孔加入100 μL EB形成培养基，使每孔体积为200 μL。

分化第0天

吸弃培养基，加入100 μL/孔基础培养基1+补充剂A诱导EB分化，用排枪轻轻吹打，使EB悬浮。在37℃CO2，5%培养箱中培养4天。

分化第4天

基础培养基1+补充剂B混合均匀，按每孔25μl，加到96孔板中，并轻轻移液8-10次混匀，使每孔培养基的终体积为125μl，将96孔板放回培养箱，37℃，5%CO2孵育4天。

分化第8天

基础培养基1+补充剂C混合均匀，按每孔25 μL，加到96孔板中，并轻轻移液8-10次混匀，使每孔培养基的终体积为150 μL，将96孔板放回培养箱，37℃，5%CO2孵育4天。

分化第12天

EB诱导结束，准备好基础培养基2（提前在冰上冷藏至少30min）；或者，在d11上使基础培养基2存储在4°C过夜。Matrigel提前与4℃解冻，然后加入冷的基础培养基2中，反复吹打溶解Matrigel，然后再培养基和Matrigel混合溶液中加入补充剂D，混合均匀，加热到rt。将96孔板中的聚集物转移到100mm培养皿中，用1-2mL的DPBS洗涤聚集体2次，再用1mL的混合培养基洗涤1次，然后加入10ml混合培养基，将培养皿放入培养箱中，37℃，5%CO2 孵育3天；D15吸掉培养皿中的培养基，重新加入不含Matrigel的混合培养基，继续孵育3天，诱导耳泡形成。