细胞是生物学实验的重要材料，也是生物细胞学实验的基础。药物、基因功能、疾病机理等的相关研究多数需要在细胞水平进行阐释。在细胞培养和消化的操作过程中，受人员操作和环境条件的影响比较大，因此每个环节都有可能导致操作的失败。以下是我们汇总了关于细胞培养和细胞消化的小贴士，希望能给正操作细胞培养和细胞消化的研发人员带来帮助
细胞系身份需明确
之所以选定某种细胞系开展实验，是因为所选细胞系的一些特性符合研究方向的设定。比如组织特性，疾病特性，功能特性，基因表达特性等。一旦用错了细胞株，对研究结果的判断就会带来很大的误差和不确定性。
而近年来，多个机构发现细胞系在培养和流通过程中，出现了很严重的交叉污染。据不统计，单就HeLa细胞系导致的污染致使3万多篇论文结果的准确性存在问题（doi:10.1371/journal.pone.0186281）。而这种情况不仅仅限于HeLa细胞。多个机构研究人员检测发现超过451个细胞系已被其它细胞吸收，在所检测细胞中污染占比46%，可见细胞交叉污染的现象非常普遍。因此，做实验前对细胞株验明正身非常重要。如果是在机构购买的细胞株，最好能让供方提供合格的STR鉴定报告。
细胞培养和消化
细胞培养大致分为两种，一种是悬浮细胞培养，一种是贴壁细胞培养，无论是哪种方式，进行细胞培养时一般会通过以下几个步骤：
细胞准备—细胞传代—细胞培养基配置—细胞接种—培养条件控制—细胞观察和培养—细胞实验—细胞冻存
当然以上只是细胞培养过程的一个基本框架，实际操作可能会因细胞类型、实验要求和实验室的标准操作规程而有所不同。
细胞消化是研发人员在操作细胞培养过程中一个步骤，一般细胞长至80%-90%密度则需要传代消化，贴壁细胞传代前，需要把细胞用消化试剂从培养容器表面解离出来，细胞得以分离成单个悬液传代至含新鲜培养基的新容器内；常见的细胞消化方法有三种：酶消化法、离子螯合法、机械消化法。其中，酶消化法是用得最多的，主要使用胰蛋白酶，一般浓度在0.25-0.5%，消化的时间根据细胞种类、作用温度等因素而变化。一般来说，0.25%的胰酶作用于单层贴壁的细胞，在37℃条件下消化1-5分钟就足够了。需要注意的是，Ca2+、Mg2+和血清、蛋白质可降低胰酶的活性，因此不含Ca2+、Mg2+，含EDTA的胰酶活性更高; 最后，可用含血清的培养基终止胰酶消化。
胰蛋白酶大致可以分为两种，一种是传统使用的动物源性的胰蛋白酶，主要提取自牛或猪的胰腺组织，其缺点是会带来病毒污染的风险；另一种则是非动物源性胰酶，即利用基因重组技术生产的重组胰蛋白酶。重组胰蛋白酶具有许多潜在用途，包括用于生产药品、用作研究工具以及生物技术应用，例如蛋白类药物的生产、细胞的分离、疫苗生产以及用于细胞分析的组织样本的制备，同时解决了传统使用的猪或牛胰蛋白酶可能带来病毒污染的风险。我国2020版药典第一次收录了无动物源性重组胰蛋白酶的质量标准。总体而言，重组胰蛋白酶在生物药及科研领域工具酶。
重组胰蛋白酶在实际应用中的使用步骤：
① 配制缓冲液：用灭菌水配制10L HBSS平衡盐溶液。
HBSS平衡盐溶液配方：400mg/L KCl，60mg/L KH2PO4，350mg/L NaHCO3，8000mg/L NaCl，121mg/L Na2HPO4·12H2O，1000mg/L葡萄糖。
② 取1g重组胰蛋白酶（细胞培养级），用HBSS平衡盐溶液溶解澄清，使胰蛋白酶的酶活浓度为500USP units/ml-1500 USP units/ml，或者使胰蛋白酶的质量浓度为0.1mg/ml-0.3mg/ml。（500USP units/ml的浓度适合大部分细胞的消化，原代细胞、组织等可适当提高浓度至1500 USP units/ml）
注意事项
1）逐典生物重组胰蛋白酶消化液含有EDTA，应注意其不同细胞的使用适配性。且本重组胰蛋白酶消化液不含抑菌剂，使用过程中要特别注意无菌操作，避免消化液被微生物污染。
2）建议将本重组胰蛋白酶消化液分装为100ml/瓶，在-15~-20℃条件下存放，能稳定存放12 个月。不宜 4℃长期保存，切忌反复冻融造成胰蛋白酶的活性降低，并可减少污染的机会。
逐典重组胰蛋白酶是一款满足药典要求的GMP级非动物源胰蛋白酶
Trypelectase 重组胰蛋白酶是逐典生物专门为疫苗、病毒载体生产设计，具有高效、非动物源和高质量标准的特点。该胰蛋白酶氨基酸序列与猪胰腺来源的胰蛋白酶一致，由大肠杆菌(E.col) 重组表达生产。在GMP级别环境中生产的重组胰蛋白酶能高效消化贴壁细胞且不造成伤害，产品质量满足药典要求。
逐典重组胰蛋白酶特点
1.GMP级生产环境、符合药典标准
2.重组生产、不含杂酶
3.批量生产、质量稳定
4.高纯度、高比活
5.非动物源原料
逐典重组胰蛋白酶应用场景
组织块的消化解离和原代细胞的获取、贴壁细胞的传代消化和收获、微载体方法培养的细胞消化和收获。
实验数据
CT26.WT 和 HEK293FT 细胞消化实验
CT26WT和HEK293FT在经Trypelectase重组胰酶消化3min后解离效果较好，细胞活率显示对细胞伤害较小，不会影响细胞传代。
Trypelectase重组猪胰酶对细胞消化过程及传代24h细胞贴壁图
