氨基酸自动分析仪是一种用于测定蛋白质水解产物中氨基酸含量的仪器。它能够对氨基酸进行自动分析,主要依赖于以下几个关键步骤和技术原理:
1、样品预处理:在进行分析之前,需要将蛋白质样品水解成单个氨基酸。这通常通过酸水解、碱水解或酶水解等方法实现。水解后的样品需要经过脱盐、浓缩等处理,以便于后续分析。
2、衍生化反应:为了提高氨基酸的检测灵敏度和选择性,通常需要对氨基酸进行衍生化处理。常用的衍生化试剂有邻苯二甲醛(OPA)和氨基酮酸(AAA)等。衍生化反应使氨基酸生成具有荧光或紫外吸收特性的产物,便于后续检测。
3、色谱分离:衍生化后的氨基酸通过液相色谱(LC)或离子交换色谱(IEC)进行分离。色谱柱内的固定相具有特定的选择性,能够根据氨基酸的性质将其分离。常用的色谱柱有阳离子交换柱、阴离子交换柱和反相色谱柱等。
4、洗脱和检测:分离后的氨基酸通过洗脱液从色谱柱中洗脱出来,然后进入检测器进行检测。常用的检测器有荧光检测器、紫外检测器和质谱检测器等。检测器根据氨基酸衍生物的光学或质谱特性,生成相应的信号。
5、数据处理和分析:检测器产生的信号被传输到数据处理系统,通过积分、校正和比对等处理,最终得到氨基酸的定量结果。数据处理系统还可以对数据进行存储、输出和报告生成等操作。
6、自动化控制:整个分析过程由计算机控制系统进行自动化控制。控制系统可以实现样品加注、衍生化反应、色谱分离、洗脱、检测和数据处理等步骤的自动控制,提高分析效率和准确性。
总之,氨基酸自动分析仪通过对样品进行预处理、衍生化、色谱分离、洗脱和检测等步骤,实现了对氨基酸的自动分析。这一过程依赖于先进的液相色谱技术、离子交换技术、荧光或紫外检测技术以及自动化控制技术,能够高效、准确地测定蛋白质水解产物中的氨基酸含量。