狗碱性成纤维生长因子（FGF-2）ELISA试剂盒说明书-化工仪器网-手机版

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狗碱性成纤维生长因子（FGF-2）ELISA试剂盒

（用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内）

原理

本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗狗 FGF-basic 单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 FGF-basic与单抗结合，加入生物素化的抗狗FGF-basic，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，zui后加终止液，在450nm处测OD值，FGF-basic浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中FGF-basic浓度。

试剂盒组成（2-8℃保存）

酶标板（Coated Wells）	96孔	酶标抗体工作液（Enzyme Conjugate）	12ml
10×标本稀释液（Sample Buffer）	12ml	20×浓缩洗涤液（Wash Buffer）	50ml
标准品（Standards）：40ng/瓶	2瓶	底物工作液（TMB Solution）	12ml
*抗体工作液（Biotinylated Antibody）	12ml	终止液（Stop Solution）	12ml

准备试剂与收集血样

1. 收集标本：血清、血浆（EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20℃或-70℃）保存，避免反复冻融。

2. 标准品液配制：使用前加入1ml蒸馏水混匀，配成40ng/ml的溶液。设标准管8管，*管加标本稀释液900ul，第二至第八管加入标本稀释液500ul。在*管中加入40ng/ml的标准品溶液100ul混匀后用加样器吸出500ul，移至第二管。如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出500ul弃去。第八管为空白对照。

3. 10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液+9ml蒸馏水）。

4. 洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）

检测程序

1. 加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，将反应板充分混匀后置37℃120分钟。

2. 洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。

3. 每孔中加入*抗体工作液100ul。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。

4. 洗板：同前。

5. 每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃30分钟。

6. 洗板：同前。

7. 每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗处反应15分钟。

8. 每孔加入100ul终止液混匀。

9. 30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。