(1)装卸,更换色谱柱时,其运动应轻巧,并且接头应适当拧紧。必须避免强烈的机械振动,以免在柱床中产生空隙。
(2)如果将仪器用于常规分析并且样品类型有限,但分析数量很多,则可能希望为每种常规分析配置一个列,这将有助于延长使用寿命列的。
(3)避免压力和温度的突然变化以及任何机械振动。
温度突然变化或色谱柱从高处掉落会影响色谱柱的填充条件;色谱柱压力的突然升高或降低也会冲击色谱柱中的填料,因此在调节流速时应缓慢进行。在进样过程中,请勿将阀门旋转太慢。
(4)溶剂的组成应逐渐改变,尤其是在反相色谱法中,不应将其从有机溶剂直接改变为所有水,反之亦然。
(5)当使用色谱柱温度控制装置时,应注意的是,只有在流动相通过后才能升高温度。
(6)一般来说,默克色谱柱不能反吹。仅当制造商指示可以反吹色谱柱时,反吹才能清除残留在色谱柱头上的杂质。否则,反冲会迅速降低色谱柱效率。
(7)选择适当的流动相,避免损坏固定相。有时可以在采样器的前面连接一个预柱。当分析柱是键合硅胶时,预柱是硅胶,因此在进入分析柱之前,流动相可以用硅胶“饱和”,以防止分析柱中的二氧化硅基质溶解。
(8)避免将具有复杂基质的样品(尤其是生物样品)直接注入色谱柱中。必须对样品进行预处理或在进样器和色谱柱之间连接保护柱。保护柱通常是填充有相似固定相的短柱,保护柱可以并且应该经常更换。
(9)经常用强溶剂冲洗色谱柱,以除去残留在色谱柱中的杂质。清洁时,应使用可混溶的溶剂替换流路系统中的流动相。逐渐地,每个流动相的体积应约为色谱柱体积的20倍,也就是说,常规分析需要50-75mL。
(10)存放色谱柱时,用乙腈或甲醇填充色谱柱,并拧紧色谱柱接头,以防止溶剂蒸发和干燥。不要将缓冲溶液在柱子中放置过夜或更长时间。
(11)在使用过程中,如果压力升高,则可能是烧结过滤器堵塞。此时,应更换过滤器或将其取出进行清洁。二是大分子进入色谱柱,导致色谱柱头被污染。如果降低柱效或色谱峰变形,则柱头可能塌陷,死体积增加。
(12)完成分离和分析后,不应立即关闭色谱分析系统,并应及时冲洗色谱分析系统,通常要超过0.5h,以除去色谱柱中的杂质。