霉菌毒素是由真菌产生的有毒的次级代谢产物，其可以通过饲料或食品进入到人和动物体内，从而引起急性或慢性中毒，危害人类和动物健康。霉菌的生长与地域、气候、季节等密切相关，因此不同地区、时间、季节的饲料和饲料原料受霉菌毒素污染的情况也有所不同。
目前关于霉菌毒素的检测方法主要有：薄层色谱法(TLC)、酶联免疫法(ELISA)、气相色谱法(GC)和高效液相色谱法(HPLC)等。由于TLC和ELISA方法不能准确定量，GC方法虽然检测灵敏度高，但样品前处理复杂，杂质干扰大。目前对霉菌毒素的检测用HPLC法比较认可，用免疫亲和柱对经过萃取的样品进行净化后，杂质少，检测限低。经试验摸索研究，建立了免疫亲和柱-高效液相色谱检测的方法，该方法灵敏度高、回收率高、重复性好。本研究的目的是利用免疫亲和柱-高效液相色谱法调查中国各个地区饲料及原料中AFB1、ZEN和DON的污染情况，为饲料生产企业和养殖者提供参考。
1 材料与方法
1.1 试验材料
高效液相色谱仪(SHIMADZU LC-20AT)；荧光检测器(SHIMADZU RF-20A)；色谱柱为cloversil C18色谱柱，5μm，4.6mm×150mm；色谱工作站(岛津高效液相色谱LC工作站)；AFB1、ZEN和DON免疫亲和柱，由北京中检维康技术有限公司生产。具体操作步骤参考中检维康公司霉菌毒素检测的标准操作程序。
1.2 试验方法
1.2.1 样品采集
1.2.2 试样的制备与提取
试样制备与提取的具体操作步骤参考中检维康公司免疫亲和柱的标准操作程序执行。
1.2.3 毒素的检测
使用免疫亲和柱-高相液相色谱法对样品中的AFB1、ZEN和DON进行检测。黄曲霉毒素检测方法参照GB/T 30955-2014《饲料中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定免疫亲和柱净化-高效液相色谱法》中的测定方法，并根据试验情况进行适当调整；玉米赤霉烯酮检测方法参照GB/T 28716-2012《饲料中玉米赤霉烯酮的测定免疫亲和柱净化-高效液相色谱法》中的测定方法，并根据试验情况进行适当调整；呕吐毒素检测方法参照GB/T 30956-2014《饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定免疫亲和柱净化-高效液相色谱法》中的测定方法，并根据试验情况进行适当调整。
2 结果与分析
按照饲料样品中AFB1、ZEN和DON含量高于检出限作为检出，本研究中阳性样品设定检出限值如下：AFB1 0.5μg/kg、ZEN 1μg/kg和DON 10μg/kg。饲料和原料中AFB1、ZEN和DON允许参照我国国家标准GB 13078-2017《饲料卫生标准》执行。
2.1 所有样品总体情况
饲料样品中4种霉菌毒素均存在超标现象，且样品中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮的阳性检出率高于2020年；
植物性原料中4种霉菌毒素均存在超标现象，且样品中玉米赤霉烯酮和呕吐毒素的最高值高于2020年；
粕类、麸类样品中玉米赤霉烯酮、T-2毒素和呕吐毒素均存在超标现象；
玉米副产物中4种霉菌毒素均存在超标现象，且样品中玉米赤霉烯酮的最高值高于2020年；玉米样品中赤霉烯酮和呕吐毒素污染较严重。
此外，多种毒素共存现象明显，霉菌毒素的共同污染可以产生累加和协同的毒性作用；在这项研究中，样品中霉菌毒素共同污染非常普遍，超过 95% 的样品含有2 种或更多的霉菌毒素。
总之，我国饲料及原料中霉菌毒素污染仍处于一个较危险的水平，必须加强对各类霉菌毒素的检测和长期监控，这对更有力地保障畜禽养殖发展和食品安全非常必要。
