Lonza Cocoon® Platform 作为高灵活性，全封闭全自动化细胞治疗生产平台，目前已经在全球范围内布局130台，并有两个项目进入临床II期，助力细胞治疗产业化快速发展。
目前Cocoon® Platform已经推出Cocoon® Platform 2.0并整合了磁分选模块，进一步加强了Cocoon®的全自动化流程。今天Lonza将为大家详细介绍Cocoon®二代Magsep 磁选Protocol的使用指南。
01
安装调试
· 房间需求：EU GMP Grade B/C，19℃-22℃
· 场地环境：高度约1.5米操作台，长0.8米，宽1.2米，承重60kg，台面光滑水平（Cocoon®需进行水平校准）
· 电力需求：100-240 VAC，50/60Hz，6 Amp（UPS电源最佳）
· 气体准备：CO2，终端管路CPC 5/32" I.D. x 1/4" O.D.
· 网络接入
02
试剂耗材
03
工艺流程以及要点
Day0 细胞分选激活
包含步骤：
· Cocoon®外：PBMC分离，磁珠孵育
· Cocoon®内：培养基添加，细胞分选，细胞激活培养
初始进入细胞请使用纯净的已进行磁珠孵育的PBMC，如使用手动人工分离的PBMC，可于培养瓶中培养24h去除贴壁杂志细胞后方可进入Cocoon®培养。
请按照磁珠供应商推荐的工艺进行磁珠孵育，强烈推荐磁珠细胞比例为1:1，过多的磁珠会导致细胞的过度激活以及后期磁珠残留的增加。
Day1 细胞转导
包含步骤：pH校准；病毒转导
Cocoon®可以根据pH来自动调整舱体内CO2的浓度，同时可以根据培养体系内的溶解氧和pH来自动调整灌流速率来满足不同客户的需求。
Day2 病毒去除
包含步骤：病毒去除
培养室全换液以进行病毒去除。
Day3-8 细胞培养
包含步骤：细胞培养；磁珠去除
分别于Day4，Day7进行第一次以及第二次磁珠去除，强烈建议于Day4进行第一次磁珠去除，过度的细胞激活会影响T细胞的亚群以及影响T细胞在Cocoon®培养室中的增殖。
Day9 细胞收获
包含步骤：
· Cocoon®内：磁珠去除，细胞收获
· Cocoon®外：细胞洗涤，细胞冻存
于Day9进行细胞收获，进行第三次磁珠去除并进行洗涤收获。
Cocoon®可以进行洗涤，但是Cocoon®本身耗材不耐受DMSO，因此如需要在Cocoon®内进行细胞洗涤分装，请使用不含有DMSO的冻存液。
04
应用案例
目前已有中国广州以及新西兰客户使用Cocoon®进行了TLR2 CAR T cells的临床研究。
CAR结构如下：
与手工生产数据相比，Cocoon®在病人和健康人间展现了更稳定的阳性率：
同时，相较于手工工艺Cocoon®展现了更加稳定的细胞产量和纯度：
最后相较手工工艺也展现了类似的CD4/8细胞亚群：
一代Cocoon®与二代Cocoon®在细胞扩增以及细胞活率方面没有明显差距：
Cocoon® Platform具有高度灵活性，能顺利地帮客户进行手工工艺的转移和放大生产工作，助力全球细胞治疗产业发展。
[参考文献]
Cell & Gene Therapy Insights 2022; 8(1), 97–112
DOI: 10.18609/cgti.2022.027
Magnetic selection for consistent cellular starting material in autologous cell therapy manufacture
