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凝胶加样缓冲液怎么配制的

上海易利原装试剂专卖

2012/3/12 11:01:39

凝胶加样缓冲液怎么配制的:

凝胶加样缓冲液

缓冲液类型
6×缓冲液
贮存温度

0.25%溴酚蓝

4℃
0.25%二甲苯青FF
40%(W/V)蔗糖水溶液

0.25溴酚蓝

室温
0.25%二甲苯青FF
15%聚蔗糖(Ficoll400)

0.25%溴酚蓝

4℃
0.25%二甲苯青FF
30%甘油水溶液

0.25%溴酚蓝

4℃
40%(W/V)蔗糖水溶液
  碱性加样缓冲液:  
300mmol/L NaOH
6mmol/L EDTA

18%聚蔗糖(Ficoll400)

4℃
0.15%溴甲酚绿
0.25%二甲苯青FF

使用以上凝胶加样缓冲液的目的有三:增大样品密度;以确保DNA均匀进入样品孔内;使样品呈现颜色,从而使加样操作更为便利,含有在电块中能以可预知速率 向阳极泳动的染料。溴酚蓝在琼脂糖中移动的速率约为二甲苯青FF的2.2倍,而与琼脂糖浓度无关。以0.5×TBF作电泳液时,溴酚蓝在琼脂糖中的泳动速 率约与长300bp的双链线状DNA相同,而二甲苯青FF的泳动则与长4kb的双链线状DNA相同。在琼脂糖浓度为0.5%~1.4%的范围内,这些对应 关系受凝胶浓度变化的影响并不显著。
选用哪一种加样染料纯属个人喜恶。但是,对于碱性凝胶应当使用溴甲酚绿作为示踪染料,因为在碱性pH条件下其显色较溴酚更蓝为鲜明。
 

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