手性柱通过手性固定相与手性化合物分子之间的相互作用实现手性识别。这种相互作用包括氢键、偶极-偶极作用、π-π作用、静电作用、疏水作用或空间作用等多种类型。这些作用力虽然微弱，但通过影响包埋复合物的形成和特殊位点与分析物的键合，共同作用于手性分离效果。
手性柱的使用注意事项：
流动相的选择：流动相中不能含有无机酸、无机碱，也不能使用不含铜离子的盐，以防止损坏设备。同时，流动相必须采用预混合方式走等度，避免在线混合方式。
pH值的控制：手性柱的使用应避免在pH低于4.0或高于7.0的条件下进行，最佳pH范围为4.0～7.0。强碱性溶液的导入尤其容易导致手性柱不可逆损坏。
流速与柱压：流速一般不大于0.8ml/min，柱压应控制在50bar～100bar之间，以防超过色谱柱使用压力上限。
柱的预处理与保养：新柱使用前需用合适的溶剂冲洗流路，并在使用过程中注意定期冲洗和保养，以延长柱的使用寿命。
样品的溶解：样品必须用水或流动相溶解，避免使用可能破坏手性固定相的溶剂。
