革兰氏染色液-染色法

革兰氏染色法是细菌学中zui常用的一种鉴别染色法。 

材    料 

    1．葡萄球菌和大肠杆菌混合菌液。

    2．结晶紫染色液。

    3．革兰氏碘液。

    4．95％酒精。

    5．番红染液。

    6．载玻片。

方   法 

    一、涂片标本的制备（见实验一）

    二、革兰氏染色法 

    1．初染：在上述已固定的涂片上，滴加结晶紫染液，染色1分钟，水洗。

    2．媒染：滴加革兰氏碘液，作用1—3分钟，水洗。

    3．脱色：滴加 95％酒精，并频频摇动玻片，至无紫色脱出为止（约20秒），水洗。

    4．复染：加番红染液，复染半分钟，水洗，用吸水纸印干后，油镜检查。

    结果：视野中可以察见两种细菌：

    葡萄球菌：紫色、球形、葡萄状排列。

    大肠杆菌：红色、杆状、散在排列。

【附】革兰氏染色法各种染液的配制 

    一、结晶紫（Ｃｙｓｔａｌ   ｖｉｏｌｅｔ）染液

    结晶紫    2.0g

    草酸铵    0.8g

    95％酒精 20ml

    蒸馏水    80ml

    先将结晶紫溶于酒精，草酸铵溶于蒸馏水中，然后将两液混合，静置４８小时使用。此染液稳定，置密闭的棕色瓶中可储存数月。

    二、革兰氏碘液

    碘         1.0g

    碘化钾     2.0g

    蒸馏水     300ml

先将碘与碘化钾混合，加水少许，略加摇动，待碘*溶解后再加蒸馏水至定量。

三、脱色剂：95％酒精

四、复染剂：番红（沙黄Ｓａｆｒａnｉｎｅ Ｏ）染液

沙黄（Ｓａｆｒａnｉｎｅ Ｏ） ０．２５ｇ

９５％乙醇 １０ｍｌ

蒸馏水 适量

将沙黄溶解于９５％乙醇中，待*溶解再加蒸馏水至１００ｍｌ