在生物制品和细胞治疗产品的质量控制中，支原体检测是重要的一环。传统的支原体检测方法包括培养法和DNA染色法，然而，随着技术的进步，核酸扩增技术（NAT）因其快速、灵敏和便捷的特点，逐渐受到行业内的青睐。NAT法在药典中的使用并非毫无限制，其检测限的设定，成为了一个重要的考量因素。
NAT法检测限的设定背景
NAT法，如聚合酶链反应（PCR）和实时荧光定量PCR（qPCR），通过扩增支原体的特定核酸序列进行检测。这种方法相较于传统的培养法和DNA染色法，具有更高的灵敏度和更短的检测周期。然而，灵敏度的提升也带来了更高的假阳性风险，因此，在药典中设定合理的检测限显得尤为重要。
DNA染色法与培养法的差异
DNA染色法，通常使用荧光染料标记支原体DNA，通过观察荧光信号来判断支原体的存在。这种方法虽然比培养法更快速，但其灵敏度相对较低，且容易受到其他DNA的干扰。因此，当NAT法替代DNA染色法时，需要更高的检测限以确保检测的准确性。
培养法则是通过培养支原体菌落来观察其生长情况，从而判断支原体的存在。这种方法虽然准确，但耗时较长，且对实验条件要求较高。因此，当NAT法替代培养法时，其检测限可以相对较低，因为NAT法具有更高的灵敏度，可以在更短的时间内检测到更少的支原体。
NAT法检测限的具体设定
根据欧洲药典的规定，当NAT法替代培养法时，其检测限需达到10CFU/ml；而当NAT法替代DNA染色法时，其检测限则需达到100CFU/ml。这一设定是基于对不同方法灵敏度和特异性的综合考虑。
对于培养法而言，10CFU/ml的检测限已经足够灵敏，可以确保在大多数情况下检测到支原体的存在。而对于DNA染色法，由于其灵敏度相对较低，因此需要将NAT法的灵敏度调整至100CFU/ml来确保检测的准确性。
NAT法检测限的验证
为了确保NAT法检测限的准确性，需要进行严格的验证。这包括使用标准品进行灵敏度测试，以及与传统方法进行对比实验。标准品通常包含已知数量的灭活支原体，可以用于评估NAT法的检测灵敏度。同时，与传统方法的对比实验可以确保NAT法的检测灵敏度不低于传统方法。德国MB公司的10CFU和100CFU的灵敏度标准品，为许多科研用户在支原体检测方法学验证方面，提供了可靠的帮助。
