放置指示剂：将 BT20 生物指示剂放置在灭菌物品内部最难灭菌的部位。对于包裹类物品，可以将指示剂放在包裹的中心位置；对于多孔的物品，如织物等，要确保指示剂被包裹在其中，避免直接接触灭菌介质而导致结果不准确。例如，在灭菌一摞手术器械时，可以将生物指示剂放在器械中间的缝隙中。
进行灭菌操作：按照灭菌设备的操作说明书设定合适的灭菌参数（如温度、压力、时间等），然后启动灭菌程序。对于高压蒸汽灭菌，通常温度设定在 121℃ - 134℃，压力在 103 - 206kPa，时间根据灭菌物品的情况在 15 - 30 分钟不等。
灭菌后处理：灭菌程序完成后，等待灭菌设备内的压力和温度自然下降到安全范围，然后取出生物指示剂。在取出过程中，要注意避免指示剂受到污染，不要用手直接触摸可能接触芽孢的部分。
培养与结果判定：将取出的 BT20 生物指示剂放入专用的芽孢培养箱中进行培养。培养温度一般为 56℃ - 60℃，培养时间通常为 24 - 48 小时。如果在培养后，指示剂颜色不变（如仍为紫色），表明灭菌彻di，芽孢全部被杀死；如果指示剂颜色发生变化（如变为黄色），则提示灭菌不彻di，有芽孢存活，需要对灭菌过程进行检查和重新灭菌。
