CGT创新疗法——慢病毒包装CAR-T免疫细胞

随着癌症治疗领域的不断创新，免疫细胞疗法（Immune Cell Therapy）逐渐成为一种备受关注的治疗方法，旨在通过激活或增强患者自身的免疫系统来对抗癌症。这类疗法的核心思想是利用免疫细胞的天然杀伤功能，增强其对癌细胞的识别和清除能力。免疫细胞疗法有多种形式，常见的包括细胞因子诱导的杀伤细胞疗法、T细胞疗法、CAR-T细胞疗法（嵌合抗原受体T细胞疗法）、CAR-NK细胞疗法（嵌合抗原受体自然杀伤细胞疗法）等。

其中，CAR-T（Chimeric AntigenReceptor T-Cell immunotherapy）细胞疗法是一种通过将患者的T细胞重新编程，使其表达针对特定肿瘤抗原的嵌合抗原受体（CAR），从而增强T细胞对肿瘤细胞的靶向识别和攻击能力的治疗方法。这种疗法已在多种血液肿瘤（如急性淋巴细胞白血病、非霍奇金淋巴瘤等）中取得了显著疗效。

Keywords: CAR-T; Lentiviral; Lentiviral Vector；Tracer Lentivirus

一、CAR-T细胞疗法的制备

一般来说，制备CAR-T细胞的过程可分为以下几个关键步骤：

图片来源：Dana-Farber Cancer Institute-CAR T-细胞临床试验帮助多发性骨髓瘤患者恢复健康

分选（T细胞分离）

制备CAR-T细胞的第一步是从患者的外周血中的白血细胞分离出T细胞。通常采用免疫磁珠分选法或流式细胞术等技术，从血液中提取出富含CD3+的T细胞。为了确保细胞的纯度，分选过程需要十分精细，确保得到足够数量的高质量T细胞。

激动（T细胞激活）

提取出的T细胞在体外需要进行激活，通常采用CD3/CD28活化扩增试剂盒（CD3/CD28 T Cells Activation /Expansion Kit）来激活T细胞。激活后的T细胞会进入活跃状态，准备进行基因转染。通过这一过程，T细胞的功能得到增强，有助于后续的基因改造和扩增。

转染（基因编辑）

激活后的T细胞将接受基因转染，以使其表达嵌合抗原受体（CAR）。这一过程通常使用慢病毒载体（Lentiviral vector）将CAR基因导入到T细胞中。慢病毒是一种有效的基因转导工具，其优点在于能够稳定地将目标基因（如CAR基因）整合入细胞基因组中。慢病毒通过感染T细胞并将CAR基因转染进T细胞的DNA中，使T细胞能够长期表达CAR。CAR基因包括一个抗体的单链可变片段（scFv），使T细胞能够识别肿瘤细胞表面的特定抗原，并通过激活T细胞的信号传导区域来启动免疫反应。如图2所示。慢病毒转染具有高效、稳定的特点，使得CAR基因能够在T细胞中长期表达。

图片来源：Singapore CAR-T细胞疗法

扩增（细胞增殖）

转染后的CAR-T细胞将进入扩增阶段，通过添加IL-2等生长因子促进细胞增殖。此过程的目的是确保在最终注入患者体内时，能够提供足够数量的CAR-T细胞。扩增过程需在无菌的条件下进行，保证细胞的质量与数量。

质控（质量控制）

在回输患者前。在制备过程中，质量控制环节至关重要。制备出来的CAR-T细胞需进行严格的检测，以确保细胞的纯度、活性、转染效率等符合治疗标准。此外，还需要检测是否存在细胞污染或不良反应，以确保细胞回输入原患者体后的安全性和治疗效果。

二、慢病毒转染免疫细胞中的重要性

在免疫细胞疗法中，慢病毒转染技术起到了至关重要的作用，尤其在基因编辑和细胞工程化的关键环节。慢病毒载体的优势，使其成为当前免疫细胞疗法中最-广泛使用的基因转导工具。

慢病毒（Lentivirus）是一类能够感染人类及其他哺乳动物细胞的病毒类型，它来源于HIV-1，经过安全改造后成为了研究人员转导目标基因的完-美工具。它隶属于逆转录病毒科， 逆转录病毒的特点是它们携带RNA基因组，并通过一种名为“逆转录酶”的蛋白将RNA转录成DNA，然后通过整合酶将DNA整合到宿主细胞的基因组中。由于慢病毒能把自身序列整合到宿主基因组，使得基因能长期稳定表达，并且能够感染分裂和非分裂的细胞。科研人员基于慢病毒这些特征，通过对慢病毒进行了安全性改造，慢病毒的基因被分散在了三个质粒，包装质粒（提供病毒的核心结构蛋白gag和反转录酶pol），包膜质粒（提供包膜糖蛋白VSV-G用于穿透细胞膜），以及带有目标基因的穿梭质粒。科学家们还敲除了HIV-1的vif、vpr、vpu和nef基因， 以及在穿梭质粒中3’LTR的U3序列，使HIV-1失去复制能力。使其无法在产生新的病毒颗粒，同时使用水泡性口炎病毒糖蛋白（VSV-G）替代了在包膜质粒中的env编码的包膜糖蛋白来扩大慢病毒感染细胞的类型。在减少了生物安全风险后，已经被用作基因导入哺乳动物细胞的载体，由于其具有高效、持久表达的特点，广泛应用于基因治疗、基因编辑和细胞生物学研究等领域。

图片来源：product/ 慢病毒包装以及慢病毒转染293T细胞过程示意图

【高效的基因转导能力】

慢病毒载体（Lentiviral vector）能有效地将目标基因（如CAR基因）转入免疫细胞中，并能够将基因稳定整合到细胞基因组中，使得CAR基因能够在细胞分裂和增殖过程中持续表达。这种高效的转染能力是确保免疫细胞疗法成功的基础。

【较低的免疫原性】

与其他病毒载体相比，慢病毒的免疫原性较低，因此使用慢病毒转染免疫细胞时，患者的免疫系统对病毒的免疫反应相对较弱。这有助于减少不良反应，尤其是在细胞回输后的长期生存中，避免了过度的免疫排斥反应。

【对免疫细胞的高适应性】

慢病毒载体（Lentiviral vector）能够有效转染多种类型的免疫细胞，尤其适用于T细胞和NK细胞等。通过慢病毒的转染，免疫细胞可以获得针对肿瘤的特异性识别能力，从而增强其杀伤肿瘤的能力。

【转染效应细胞对靶细胞的精准性】

在免疫细胞疗法中，转染效应细胞是指那些通过转染后能够表达CAR并发挥抗肿瘤作用的免疫细胞。慢病毒能够精准地将CAR基因转入这些效应细胞，使其能够识别并攻击肿瘤靶细胞。靶细胞是指被这些免疫细胞识别并杀伤的肿瘤细胞。通过慢病毒转染，免疫细胞可以增强对肿瘤细胞的特异性识别和杀伤能力，从而提高治疗效果。

鉴于此，IPHASE作为体外研究生物试剂引-领者，为缩短免疫细胞疗法客户转染的复杂性和提高基因稳定转染的成功性，开发了慢病毒包装试剂盒（Lentivirus Packaging Kit）及慢病毒浓缩液（Lentivirus Concentration Reagent），为客户提供一站式解决方案！

三、IPHASE慢病毒产品

IPHASE慢病毒包装试剂盒（IPHASE Lentivirus Packaging Kit）包含了进行慢病毒包装（Lentivirus Packaging）所需的全部核心试剂，极大简化了实验流程，节省了时间和精力。此试剂盒包括：

· Lentivirus Packaging Plasmid Mix

· Transfect Reagent

· eGFP Plasmid

· IPHASE Lentivirus Concentration Reagent

该试剂盒真正实现了精简试验！无需繁琐的试剂准备，仅需对照说明书便可高效完成慢病毒包装。试剂盒的独-特优势在于：包装时间短、病毒浓度高、操作简便，非常适合慢病毒包装的初学者使用。每一组试剂都经过严格质量检测，确保实验结果准确、可靠、重现性强，从而显著提高转染效率和病毒载体的稳定性，为您的免疫细胞制备提供强有力的技术支持。

此外，为节省客户成本，IPHASE同时开发、生产了慢病毒浓缩液（Lentivirus Concentration Reagent），为广大客户提供了一种快捷、简便的浓缩解决方案。只需将慢病毒上清液与浓缩试剂混合，进行简单的孵育步骤，再通过标准离心机离心，即可快速富集慢病毒颗粒。无须超速离心机，这对大多数实验室用户来说，是一个便捷且经济的选择。

· 浓缩快速：浓缩过程仅需1小时即可完成。

· 提升滴度：该试剂能够将病毒载体滴度提高10-100倍，同时减少材料损失，确保您获得高效的病毒载体。

· 简便易操作：操作简单，无需复杂设备和长时间孵育，极大提升工作效率。

简而言之，IPHASE慢病毒浓缩液（Lentivirus Concentration Reagent）不仅能显著提高转染效率，还能为免疫细胞制备提供高质量的病毒载体支持，是日常实验、临床前研究及其他应用领域不-可或-缺的优异产品！

综上所述，免疫细胞疗法，特别是CAR-T细胞和CAR-NK细胞疗法，代表了现代肿瘤治疗的新方向。通过精细的细胞分选、激活、转染、扩增和质控等工艺，科学家能够为患者制备出高效、安全的免疫细胞产品，从而实现对肿瘤的精准治疗。而慢病毒转染作为其中的核心技术，因其高效、稳定的特性，在CAR-T和CAR-NK细胞的制备过程中起到了至关重要的作用。随着技术的不断进步，免疫细胞疗法有望为更多患者提供全新的治疗选择，带来更大的临床价值。随着技术的不断进步，免疫细胞疗法在未来有望为更多癌症患者带来革命性的治疗希望。

与此同时，IPHASE为满足基因转导、基因表达和疾病研究等多个领域客户的需求，不仅提供慢病毒包装试剂盒和慢病毒浓缩液，还在客户不同需求的基础上分别使用绿色荧光蛋白（Green fluorescent protein， GFP）、红色荧光蛋白mCherry和Luciferase荧光素酶对Lentivirus进行包装，形成示踪病毒（Tracer Lentivirus），方便客户对目标细胞进行体外和/或体内的位置追踪，确定目标细胞靶向性！

GFP是从水母 Aequorea victoria 中提取的天然蛋白质，能够在紫外光或蓝光的激发下发出明亮的绿色荧光，被广泛用于细胞标记和追踪。通过将GFP基因包装到Lentivirus中，研究人员能够转导GFP进入体外实验中的目标细胞基因，实时监测目标细胞，并通过荧光显微镜进行可视化分析。mCherry是一种红色荧光蛋白，广泛应用于双标记实验中，尤其在与GFP联合使用时。mCherry的发射波长较长，在红光激发下能够发出明亮的红色荧光。这使得它成为了与GFP等其他荧光标记物配合使用的理想选择。研究人员可通过同时使用GFP和mCherry示踪病毒来转导不同的细胞，研究人员可以在同一实验中观察不同细胞的行为，为复杂的生物过程提供更多的可视化信息。因此，GFP和mCherry均为体外进行目标细胞实时追踪监测的有效荧光蛋白！

而Luciferase是一种能催化荧光素底物发光的酶，广泛应用于细胞和动物模型中的基因表达检测和动态监测。Luciferase的优势在于，它不依赖于外源荧光染料，而是通过底物（荧光素D-Luciferin）和Luciferase产生反应来产生可被检测的光信号，Luciferase的发光信号具有高灵敏度和较长的发光时间。Luciferase常用于体内实验中，尤其是用于监测肿瘤生长、药物反应、感染过程等动态生物学研究。

鉴于此，IPHASE为满足不同客户体外和/或体内试验对于目标细胞追踪的要求，在此基础上，开发了GFP和Luciferase及mCherry和Luciferase两款已包装好的示踪用病毒，客户可根据试验需求分别选择示踪病毒，也可搭配使用，省时省力，提高效率，是实时追踪监测目标细胞动态的又一大利器！

四、IPHASE免疫疗法相关产品

除了应用于CAR-T或CAR-NK等的慢病毒相关产品外，IPHASE作为体外研究生物试剂引-领者，在支持CGT创新疗法等其它领域也不遗余力，开发生产了经白细胞单采术分离的白细胞和PBMC及多种免疫细胞分离试剂盒，助力免疫细胞疗法蓬勃发展！

IPHASE产品均具有以下优势，且每批次产品可为您出具IPHASE自行验证的COA数据。

安全性

IPHASE提供产品的捐献者/动物体均为健康供体，经过预筛选，且病毒检测为阴性（HIV-1/2,HBV,HCV,梅毒）。

合规性

IPHASE提供捐献者签署的知情同意书，来源清晰可溯源。

专业性

IPHASE提供的经白细胞单采术所得的产品，均由专业人员操作执行，每个批次的产品均提供相应COA，且全程冷链运输，安全、快速保证产品质量。

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高质量的售后服务，确保试验一路绿灯。

可定制

可根据客户的特殊需求“专人专-供”。

IPHASE/汇智和源凭借多年的研发经验，推出了多领域、多种类的高-端科研试剂，为药物早期研发提供筛选工具，为生命科学领域的探索提供新材料、新方法和新手段，为食品、药品、化学品等的遗传毒性研究提供便捷产品，望广大科研工作者咨询。

发    文    章    得    奖    励

凡使用本公司产品，在国内及国际刊物上发表论文（论文发表日起一年内），并注明产品属于IPHASE BIOSCIENCES Co.,Ltd. / 汇智和源生物技术（苏州）有限公司所有，即可申请奖励。根据发表刊物影响因子不同，给予不同金额奖品：

非SCI论文及IF≤5分，500元礼品；

5分＜IF≤8分 800元礼品；

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注：①礼品卡也可兑换同等金额产品购买抵用券；

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汇智和源，致力于为创新药研发企业及生命科学研究机构提供高品质的生物试剂，IPHASE为公司核心品牌，品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”。