简介
FLUOREYE是一种荧光检测解决方案，专为与现有系统无缝集成而设计，无需额外空间或设备。它有两个激发波长和两个检测波长，可实现集成的荧光信号定量和后续均一化，无需用户干预。在这里，我们展示FLUOREYE可用于测量被SYBR™ Safe（一种高灵敏度的荧光核酸染料）染色的活细胞荧光强度，从而确定96孔板中培养的细胞的融合度。因此，FLUOREYE将其用途扩展到细胞生物学领域。在Hamilton自动化液体处理设备上使用FLUOREYE进行自动细胞融合度测量，可以在96孔板中追踪培养细胞的生长，而不需要显微镜、精密的成像设备或复杂的分析软件。按照易操作的自动化工作流程，把细胞用SYBR™ Safe核酸染料（Invitrogen S33102）进行染色，然后将培养板放在工作站台面上进行分析。这种方法减少了成本和用户干预，同时提高了可重复性和通量。
优点
1. 在细胞检测或细胞培养的自动化解决方案中，它是一种测量细胞融合度的实用、经济高效的工具。
2. 无需动手就可以自动选择合适的时间点开始细胞培养实验、传代或进行细胞增殖实验。
3. 高度可重复、标准化和准确的细胞融合度测定方法。
使用Hamilton FLUOREYE自动测量细胞融合度是传统显微镜成像的一种高性价比的替代方法，也是哺乳动物细胞生长追踪的一种无人值守、易于整合的台面式解决方案。
细胞培养
在标准培养条件下，在添加了10%FBS（Gibco，A5256801）的高糖DMEM（Gibco,L0101-500）培养基中培养HEK293细胞。实验前一天，对细胞进行计数，并将其接种在黑色96孔板（Greiner CELLSTAR 655090）中。SYBR™ Safe染色和FLUOREYE测量在Hamilton Microlab STAR平台上进行。为避免移液过程中细胞脱落，每一步操作完成后，孔中都要留出最少50µL的液体。用生长培养基将50µL SYBR Safe染料稀释到500倍，然后每孔加入50µL染色液，最终稀释到1000倍。
用户将细胞放回培养箱培养30分钟。培养结束后，将96孔板重新放到STAR平台上。清洗细胞并替换为D-PBS培养基，以减少背景荧光。FLUOREYE测量在470nm波长下进行，LED功率为40。为了将测得的强度与细胞融合度进行定量比较，进行了手动显微镜检查。
使用ImageJ软件进行成像和融合度分析
用于融合度测量的亮场（BF）图像由配备5倍物镜和Axiocam 305成像装置的蔡司Axiovert 5显微镜拍摄。对BF的tiff图像格式进行裁剪以减少孔壁阴影，并使用ImageJ（1.54f 版）进行分析。测量像素面积，并以总覆盖面积的百分比表示融合度。
技术
FLUOREYE体积小巧，所需空间极小，可轻松集成到现有设备中，升级到荧光检测解决方案，而无需昂贵的整合、外罩、运输设备或为避免碰撞所进行的编程工作。FLUOREYE具有两个激发波长和两个检测波长，可进行集成的荧光定量，随后无需用户干预的均一化使之可与目前市场上的许多试剂盒兼容。
结果
用SYBR Safe核酸染料对HEK293细胞进行染色，然后用FLUOREYE在470nm波长下测量荧光强度。每孔强度与BF显微镜成像计算出的融合度相关。总体而言，实际细胞融合与FLUOREYE测量的荧光强度之间存在很强的相关性（R2=0.976）。细胞汇合度和荧光强度之间的线性相关在10% - 80%之间尤为准确，而在密度较高时，差异增大，这可能是由于细胞压实和过度生长造成的。此外，FLUOREYE读数显示，细胞融合度在10 - 80%之间时，复孔之间的差异非常小（CV <8%）。
