由于每个患者对治疗药物的吸收和代谢不同，正确的给药对避免毒性反应和保持药物在治疗水平至关重要，这就是患者血清或血浆样本中的治疗药物监测（TDM）发挥作用的地方。该分析的金标准是LC-MS/MS；然而当样本量比较大时，手动制备样本是一个很大的挑战。在这里，我们描述了如何使用Hamilton MassSTAR自动化系统与MassTox®TDM Series A通过LC-MS/MS对100多种药物进行自动样品制备和分析。
系统描述
MassSTAR基于Hamilton Microlab® STARlet平台，配备4个通道：CO-RE®抓手、条形码阅读器和一个整合的离心机。台面上由样本载架、试剂载架、标准品/对照载架、深孔板(DWP)和移液吸头载架以及Hamilton加热振荡器(HHS)组成。每次运行，系统最多可处理96份样本，包括对照和标准品。
试剂盒描述
样品制备基于Chromsystems的MassTox®TDM Series A，这是一种模块化系统，由三个部分组成：特定参数集、色谱柱和BASIC Kit A。参数集包含特定药物的单个校准品、对照品和内标物。色谱柱本身可监测近200个参数，而无需色谱柱切换或改变流动相。结合所有参数集中几乎相同的样本制备工作流程，这有助于最大限度地减少实验室的工作量。到目前为止，超过100个参数的样品制备可以在MassSTAR上实现自动化，将来会有更多。这些药物包括抗抑郁药、抗癫痫药、抗真菌药、麦考酚酸和精神安定药。为了获得较高的数据准确性，几乎所有的参数都由内部标准来保障。结果的可追溯性通过使用基于基质的校准材料来保证。
工作流程
首先，加载所有资源，并追踪样本和板的条形码。均质化后，将50µl样本/校准品/对照品转移至96深孔板中。加入25µl提取缓冲液，并以600 rpm转速振荡2分钟。将250µl制备的内标溶液移液至各孔中，并以1000 rpm转速振荡30秒。然后以2000xg离心5分钟，分离沉淀物。将上清液转移至第二个深孔板中，并用稀释缓冲液稀释。稀释因子取决于参数设置和特定质谱仪。
技术
其中一个关键特点是设备的吸放液全程实时监控 (TADM™)技术。实时监控每个移液通道中的每个吸液和分液步骤。TADM™通过可追溯的数字审计跟踪验证样本转移，并识别错误，如样本中有血凝块或转移的体积不正确。图形用户界面 (GUI) 引导用户完成加载过程以及库存检查（例如，条形码匹配、检查微孔板位置是否正确、验证试剂的适当液位）。这意味着在运行开始前，所有试剂和耗材均可获得足够的数量，确保不需要进一步的用户干预，从而延长无人值守时间。描述性界面监测样品制备过程的实时状态，并显示系统接下来将执行的步骤。GUI还防止无效的用户输入，并保护方法文件免受未经授权的操作。此外，为MassTox®TDM Series量身定制的试剂载架能够将分析试剂加载到其原始容器中，试剂不必转移，节省时间，防止污染和试剂混合，并减少液体的蒸发。
结果
测定了所有药物的回收率，回收率取决于分析物，范围81%-115%。
测定了重复性、中间精密度和重现性，以确定总体方法的精度。将至少两种不同浓度水平的样品制备10次，并在单个序列中进行测定。变异系数为0.6到13.7%之间，取决于相应的分析物和浓度水平。在不同日期制备并测定至少3个不同浓度水平的样品（20×5或10×2×2设计），得到的变异系数在0.9%至18.9%之间。此外，在三个不同的实验室中，在五个不同的日期，使用进行五次样品制备（3x5x5设计），测定至少三个浓度水平的重现性。所得变异系数在3.2～25.7%之间。说明书中提供了每个参数集的综合数据。
对于所有分析物，通过向血清和血浆样本中加规定量的标准品测定定量下限(LLOQ)和定量上限(ULOQ)。对于所有药物，LLOQ和ULOQ涵盖治疗药物监测所需的临床相关浓度范围。
方法比较
使用MassTox®TDM Series A采集并分析真实患者样本。所有样本均已手动处理并在MassSTAR上进行比较。
结果表明，MassSTAR样本制备与手动处理之间具有良好的相干性和可比性。
