产品简介：

Lezol是一种自主研发和生产的用于细胞或组织的总RNA提取试剂，Lezol采用与Invitrogen TRIzol相似的原理和方法，Lezol颜色、抽提的方法和步骤亦与InvitrogenTRIzol相同。Lezol含酚和异硫氰酸胍等物质，能迅速裂解细胞或组织并且灭活核酸酶，保持RNA的完整性，加入氯仿并离心后，溶液形成上清层为水相(无色)、中间层、下层为有机相(红色)，上清层用异丙醇沉淀回收总RNA，中间层用乙醇沉淀回收DNA，下层用异丙醇沉淀回收蛋白。

 Lezol适用于从各种组织或细胞中快速分离总RNA，既可用于小量样品(50～100mg组织、5×106细胞)，也可用于大量样品(>1g组织/>107细胞)。提取的总RNA质量高，可用于Northern blot、Dot blot、polyA筛选、体外翻译、RNase保护分析和分子克隆，Lezol具有以下特点：①适用范围广；②操作简单，整个过程1小时内完成；③纯度高；④污染少。该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

自备材料：

1、试剂：无水乙醇、氯仿、异丙醇、DEPC处理水等。

2、耗材： RNase 广泛存在于人的皮肤上和体液及环境中，RNase 是导致RNA降解的最主要物质，非常稳定。操作时应佩戴一次性口罩、手套、帽子。塑料制品、玻璃和金属物品、 实验仪器等应清除 RNase，移液器吸头、EP管等制品的 RNase free 处理尤为重要。

3、仪器：低温高速离心机、低温冰箱。

操作步骤(仅供参考)：

1、样品准备(1)贴壁细胞：

①接裂解：直接在培养瓶/皿中加入Lezol 裂解细胞，每10cm² 面积加 1ml  Lezol，用移液器吹打混匀。

②胰蛋白酶消化：用无菌 PBS 洗涤细胞后，加入含有0.05～0.25%胰蛋白酶的 PBS 处理细胞，当细胞脱离容器壁后，加入含有血清的培养基终止反应，将细胞溶液转移至无RNase的离心管中，5000～6000g 离心5min，收集细胞沉淀，去除上清。收集细胞时一定要将细胞培养液去除干净，否则裂解不，降低 RNA 收获率。

⑵悬浮细胞：无需清洗细胞，直接5000～6000 g 离心5min，收集细胞，每5×106～107动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加入1ml Lezol。

⑶组织：取新鲜动物或者植物组织或者-70℃冻存组织，50～100mg 组织在液氮中充分研磨或者加入1ml Lezol 研磨或者用匀浆器匀浆处理，样品体积一般不超过 Lezol体积的10%。研磨要迅速，以1min为佳。

⑷血液：取0.5～1 ml 新鲜或冻存的血液，12000g 离心 5min，去除血浆，加入 1ml Lezol， 充分振荡混匀。

2、核酸分离：充分振荡混匀(可以置于低温/超低温冰箱冻存 5～10 min 后，充分振荡，反复 1～3 次)，将裂解样品或匀浆液室温放置 5～10min，使核蛋白与核酸分离。

3、样品分层：加入 0.2 ml氯仿/1ml Lezol，剧烈振荡 15 s，室温放置 2～3 min，置于 4℃ 离心机，12000 g 离心 10～15 min；上层为水相，中间层和下层为有机相，RNA 在上层水相。

4、沉淀 RNA：吸取上层水相(约 500μl)转移至无 RNase 的离心管中(不要吸取任何中间层物质,否则会有染色体DNA 污染)，加入等体积异丙醇混匀(或者加入1.2 倍体积 Trizol 专用 RNA 沉淀液，超低温冰箱放置 2～3hr,可以大大提高 RNA 回收率），室温放置 15～20 min，12000 g 4℃离心 10 min，离心后管侧或管底形成胶状沉淀，弃上清。

5、洗涤 RNA：加入 1ml DEPC 水配制的 75%乙醇/1ml Lezol 洗涤沉淀(或者加入 1ml  Trizol 专用 RNA 洗涤液，可以大大提高 RNA 纯度），室温放置 5～10 min， 7500g 4℃离心 5 min，弃上清，室温干燥 5～10 min，不宜过分干燥，否则 RNA 难以溶解。

6、溶解 RNA：加入 30～50ul RNase-free ddH₂O 充分溶解 RNA，-70℃长期保存或直接用于后续试验。对于肝、胰腺、肾等组织中 RNase 含量高的样品，沉淀时用 100% 去离子甲酰胺溶解。

分析与定量：

1、测定样品在 260 nm 和 280 nm 的吸收值确定 RNA 的质量，按 1OD=40pg RNA 计算RNA 的产率，OD_260/280 在 1.8～2.0 视为抽提 RNA 纯度较好，浓度在 4μg/ml 以上的样品适于用分光光度计测定。

   2、进行甲醛变性琼脂糖电泳，确定 RNA 的完整性和污染情况。

   3、核酸分析仪测定 RNA 的质量和纯度。

注意事项：

   1、样品保存：加入 Lezol 混匀后，样品可在-70℃放置 1～2月；RNA 样品可以在 70%酒精中-70℃保存 2～4周：如果需要长期保存，应置于超低温冰箱中保存。

   2、Lezol 是强腐蚀性物质，污染皮肤或眼睛后，立即用清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医生的帮助。

   3、Lezol 可常温运输，建议保存 4℃保存。

   4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：12个月有效。