在制药工业中，细菌内毒素的检测是确保药品安全与质量的关键环节。然而，传统的检测方法高度依赖于有限的鲎血资源，且易受干扰物质影响，导致检测结果的不准确性。因此，开发新型、高效且准确的细菌内毒素检测试剂显得尤为重要。
当前，市场上出现了两种新型的替代方法：重组鲎试剂（rCR）和重组C因子（rFC）。通过深入对比与分析，我们可以清晰地看到重组鲎试剂（rCR）在细菌内毒素检测中的显著优势。
PyroSmart NextGen®重组鲎试剂（PSNG）是市场首-款完整的重组级联试剂（rCR）。它通过基因工程技术合成，模拟了天然鲎试剂LAL的酶联反应，包含重组C因子、重组B因子和重组凝固酶原。内毒素激活重组C因子后，依次激活重组B因子，最终将重组凝固酶原转化为凝固酶，通过显色底物释放的呈色团来量化内毒素。这三步反应机制确保了检测的准确性和灵敏度。
反应机制：左侧为重组鲎试剂(rCR)右侧为重组C因子(rFC)
相比之下，重组C因子（rFC）的反应机制较为简单，仅涉及单一的重组C因子。内毒素激活C因子后，活化的C因子裂解荧光底物产生荧光信号，通过荧光酶标仪定量测定。然而，这种单一的反应路径可能导致检测特异性受限，从而影响了检测的准确性。
重组鲎试剂（rCR）的另一大优势在于其检测方法与设备的兼容性。它无需更换方法和设备，可直接使用现有的细菌内毒素检测方法（动态显色法）和设备（在现有的Pyros Kinetix® Flex细菌内毒素定量检测系统、酶标仪均可使用）进行检测和分析，这不仅降低了检测成本，还提高了检测效率。
Pyros Kinetix® Flex细菌内毒素定量检测系统
而重组C因子（rFC）则需要使用特定的终点荧光法，并配备特定荧光酶标仪进行检测。这不仅增加了额外的成本投入，还限制了其在实际应用中的灵活性。
在复溶和检测效率方面，重组鲎试剂（rCR）同样表现出色。它只需单步复溶，且检测试剂用量较少（仅需50μL）。整个检测过程快速高效，仅需15分钟即可完成。这既节省了时间成本，又提高了检测效率。
而重组C因子（rFC）的复溶过程则相对复杂，需要多种试剂的混合和预孵化步骤（过程不低于10分钟），且检测试剂用量较大（100μL）。这不仅延长了检测时间，还增加了检测成本。
通过适合性/一致性研究测试多个样品发现，重组鲎试剂（rCR）比重组C因子（rFC）具有更低的不干扰稀释倍数，表明其在广泛的产品检测中具有更好的适用性。
注：蓝色的相对回收率表示有效的回收率，红色的回收率是无效的（超出可接受范围）。
可比性研究也进一步证实了重组鲎试剂（rCR）在检测多种来源的细菌内毒素和水样时具有较好的相对回收率。而重组C因子（rFC）在某些特定样品中的检测效果可能不如重组鲎试剂（rCR）。
综上所述，重组鲎试剂（rCR）在反应原理、检测方法、复溶过程及样品适用性方面均表现出优于重组C因子（rFC）的优势。重组鲎试剂（rCR）不仅模拟了天然鲎试剂的酶联反应，还消除了与（1→3）-β-D-葡聚糖交叉反应导致的假阳性问题，具有更高的检测准确性和灵敏度。
相比之下，重组C因子（rFC）的反应机制较为简单，检测特异性相对较低，且操作复杂、检测成本较高。因此，在新型细菌内毒素检测方法中，重组鲎试剂（rCR）已成为更为先进和实用的技术选择。
随着制药行业的快速发展，新的细菌内毒素检测方法已成为大势所趋。重组鲎试剂（rCR）凭借其显著优势，有望在未来得到更广泛的应用和推广。
