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肽聚糖(胞壁素)ELISA试剂盒:助力微生物感染诊断与研究

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2025/1/6 16:15:19

肽聚糖(粘肽)ELISA试剂盒是一种用于体外定量测量生物样本中肽聚糖浓度的ELISA试剂盒。目前处于开发阶段。

 

艾美捷肽聚糖(胞壁素)ELISA试剂盒

货号:abx585338

靶标:肽聚糖(粘肽)

反应性:通用(所有物种)

检测应用:ELISA

推荐稀释度:最终用户应确定最佳稀释度/浓度。

储存:运输时温度为4°C。收到后,请按照试剂盒说明书中的储存说明进行储存。

有效期:该试剂盒的有效期至少为6个月。根据要求可提供长达12个月的有效期。

稳定性:试剂盒的稳定性由活性损失率决定。在适当的储存条件下,有效期内的损失率小于5%。为了尽量减少性能波动,操作程序和实验室条件应严格控制。还强烈建议整个检测过程由同一位用户完成。

检测范围:1.23 ng/ml - 100 ng/ml

灵敏度:< 0.51 ng/ml

标准品形式:冻干

检测方法:比色法

检测类型:竞争法

检测数据:定量

样本类型:生物样本。

靶标类型:抗原

检测原理:该试剂盒基于竞争酶联免疫吸附试验技术。96孔板上预先包被有抗体。将标准品、测试样本和生物素偶联试剂加入到孔中并孵育。生物素标记的粘肽和未标记的粘肽在预包被抗体上发生竞争抑制反应。然后加入HRP偶联试剂,并将整个板孵育。在每个阶段使用洗涤缓冲液去除未结合的偶联物。使用TMB底物来定量HRP酶促反应。加入TMB底物后,只有含有足够粘肽的孔才会产生蓝色产物,加入酸性终止液后变为黄色。黄色的强度与板上结合的粘肽量成反比。在微孔板读数仪中以450 nm波长光谱光度法测量OD,从而可以计算出粘肽的浓度。

试剂盒组成:列出的试剂盒组成仅供参考。产品说明书可能略有不同。产品应按照随产品一起提供的产品说明书中的说明使用。

预包被的96孔微孔板

标准品

标准品稀释缓冲液

洗涤缓冲液

检测试剂A

检测试剂B

稀释液A

稀释液B

TMB底物

终止液

板封膜

 

所需但未提供的材料:

37°C培养箱

多通道和单通道移液管及无菌移液枪头

喷雾瓶或自动微孔板洗涤器

1.5 ml

蒸馏水

吸水滤纸

100 ml1升量筒

微孔板读数仪(波长:450 nm

ELISA振荡器

 

试剂准备:此程序仅供参考。

标准品:用推荐体积的标准品稀释缓冲液制备标准品溶液。然后按照协议中的指示,用标准品稀释缓冲液对标准品溶液进行系列稀释。

洗涤缓冲液:按照协议中的指示,用蒸馏水稀释浓缩的洗涤缓冲液。

检测试剂准备:计算所需的工作溶液的总体积。分别用稀释液A和稀释液B将检测试剂A和检测试剂B稀释1:100

检测程序:此程序仅供参考。产品说明书可能略有不同。产品应按照随产品一起提供的产品说明书中的说明使用。

设置标准品、测试样本和对照孔。

50 µl稀释后的标准品加入到标准品孔中。

50 µl标准品稀释缓冲液加入到对照(零)孔中。

50 µl稀释后的样本加入到样本孔中。

立即向每个孔中加入50 µl检测试剂A。在37°C下孵育1小时。

洗涤3次。

向每个孔中加入100 µl检测试剂B。在37°C下孵育30分钟。

洗涤5次。

向每个孔中加入90 µl TMB底物。在37°C下孵育10-20分钟。

加入50 µl终止液。

450 nm处测量OD

协议:此程序仅供参考。产品说明书可能略有不同。产品应按照随产品一起提供的产品说明书中的说明使用。 在使用前将试剂盒组分和样本平衡至室温(18 - 25 °C)。建议每次测试绘制标准曲线。

在预包被板上分别设置标准品、测试样本和对照(零)孔,然后记录它们的位置。建议每个标准品和样本至少重复测量两次。

50 µL的每个标准品、对照和样本加入到相应的孔中。

移除盖子并丢弃液体。

立即加入50 µl检测试剂A工作溶液。用盖子封住板,在37°C下孵育1小时。

移除盖子并丢弃溶液。用1X洗涤缓冲液洗涤板3次。

向每个孔中加入100 µL检测试剂B工作溶液,封住并孵育37°C 30分钟。

丢弃溶液并按照前一步骤用洗涤缓冲液洗涤板5次。

向每个孔中加入90 µl TMB底物。用盖子封住板,在37°C下孵育10-20分钟。避免暴露在光下。孵育时间仅供参考,最佳时间应由最终用户确定。不要超过30分钟。

向每个孔中加入50 µL终止液。立即在450 nm处读取。

结果计算:该检测是竞争性的,因此样本中粘肽浓度与测量的吸光度之间存在负相关。创建一个以标准浓度的对数(y轴)和平均吸光度(x轴)为坐标的图表。通过标准点应用最佳拟合趋势线。样本的粘肽浓度可以从标准曲线上插值得出。

 

检测精密度:

批内精密度(同一批次内的精密度):分别在一块板上测试3个低、中、高浓度水平的肽聚糖样本,每个样本测试20次。

批间精密度(不同批次之间的精密度):在3块不同的板上测试3个低、中、高浓度水平的肽聚糖样本,每块板上测试8个重复样本。

CV%=(标准差/平均值)×100

批内精密度:CV<10%

批间精密度:CV<12%

注意事项:本品仅限研究使用。

范围和灵敏度可能会发生变化。为获得准确结果,样本浓度必须稀释至试剂盒的中等范围。请注意,AbbexaELISACLIA试剂盒针对的是天然样本的检测,而不是重组蛋白。Abbexa无法保证重组蛋白的检测,因为它们可能具有与天然蛋白不同的序列或三级结构。

 

数据示例:

41.png

图:显示肽聚糖(Murein)标准OD数据的图表

 


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