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大鼠补体C3(C3)ELISA试剂盒--检测程序和测试原理方案

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2025/1/7 15:54:46

Abbexa大鼠补体C3C3ELISA试剂盒是一种用于体外定量测量血清、血浆和其他生物液体中大鼠补体C3C3)浓度的ELISA试剂盒。

 

艾美捷大鼠补体C3(C3)ELISA试剂盒

货号:abx256750

靶标:补体C3C3)  

反应性:大鼠  

已测试应用:ELISA  

推荐稀释度:最终用户应确定最佳稀释度/浓度。  

储存:以4°C运输。收到后,根据试剂盒说明书中的储存说明储存试剂盒。  

有效期:该试剂盒的有效期至少为6个月。根据要求可提供长达12个月的有效期。  

稳定性:试剂盒的稳定性由活性损失率决定。在适当的储存条件下,到期日内的损失率小于5%。为尽量减少性能波动,应严格控制操作程序和实验室条件。还强烈建议整个检测过程由同一用户完成。  

检测范围:7.81 ng/ml - 500 ng/ml  

灵敏度:4.69 ng/ml  

标准形式:冻干  

检测方法:比色法  

检测类型:夹心法  

检测数据:定量  

样本类型:血清、血浆和其他生物液体。  

 

大鼠补体C3(C3)ELISA试剂盒检测原理:

该试剂盒基于夹心酶联免疫吸附测定技术。96孔板上预先包被有抗体。将标准品、测试样品和生物素偶联试剂加入孔中并孵育。然后加入HRP偶联试剂,并将整个板孵育。在每个阶段使用洗涤缓冲液去除未结合的偶联物。使用TMB底物定量HRP酶促反应。加入TMB底物后,只有含有足够C3的孔才会产生蓝色产物,加入酸性终止液后变为黄色。黄色的强度与板上结合的C3量成正比。在450 nm波长下用微孔板读数器比色法测量光密度(OD),从而计算出C3的浓度。  

 

大鼠补体C3(C3)ELISA试剂盒组分:  

预包被的96孔微孔板  

标准品  

标准品稀释缓冲液  

洗涤缓冲液  

检测试剂A  

检测试剂B  

稀释液A  

稀释液B  

- TMB底物  

终止液  

板封  

所需但未提供的材料:  

- 37°C培养箱  

多通道和单通道移液器及无菌移液器头  

喷雾瓶或自动微孔板洗涤器  

- 1.5 ml试管  

蒸馏水  

吸水滤纸  

- 100 ml1升量筒  

微孔板读数器(波长:450 nm)  

- ELISA振荡器  

 

试剂准备:  

1)标准品:用推荐体积的标准品稀释缓冲液制备标准品溶液。然后按照协议中的指示,用标准品稀释缓冲液进行标准品溶液的系列稀释。  

2)洗涤缓冲液:按照协议中的指示,用蒸馏水稀释浓缩洗涤缓冲液。  

3)检测试剂准备:计算所需的工作溶液总量。分别用稀释液A和稀释液B将检测试剂A和检测试剂B1:100稀释。  

 

检测程序:

1)设置标准品、测试样品和对照孔。  

2)将100 µl稀释后的标准品加入标准品孔中。  

3)将100 µl标准品稀释缓冲液加入对照(零)孔中。  

4)将100 µl稀释后的样品加入样品孔中。在37°C下孵育90分钟。  

5)将100 µl检测试剂A加入每个孔中。在37°C下孵育1小时。  

6)洗涤3次。  

7)将100 µl检测试剂B加入每个孔中。在37°C下孵育30分钟。  

8)洗涤5次。  

9)将90 µl TMB底物加入每个孔中。在37°C下孵育10-20分钟。  

10)加入50 µl终止液。  

11)在450 nm处测量OD值。  

 

结果计算:

对于计算,将每个参考标准品和每个样品的O.D.450重复读数平均,并减去平均对照(零)O.D.450读数。可以将标准曲线绘制为每个参考标准品溶液的相对O.D.450Y)与每个标准品溶液的相应浓度(X)之间的关系。样品的C3浓度可以从标准曲线中插值计算得出。  

 

检测精密度:  

批内精密度(同一检测内的精密度):分别在一块板上测试3个低、中、高浓度水平的补体C3C3)样品,各测试20次。  

批间精密度(不同检测之间的精密度):在3块不同的板上测试3个低、中、高浓度水平的补体C3C3)样品,每块板8个重复。  

CV%=(标准差/平均值)× 100  

批内精密度:CV<10%  

批间精密度:CV<10%  

41.png

显示大鼠补体C3C3)标准OD数据的图表


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