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2025/1/10 16:06:51慢病毒载体可感染分裂细胞及非分裂细胞。其转移基因片段容量较大,目的基因表达时间较长,不易引发宿主免疫反应等诸多优点;因此,慢病毒己经成为表达外源基因或外源shRNA的常用载体形式之一, 并且应用越来越广泛。
慢病毒浓缩液介绍
EZ慢病毒浓缩液是一种快速浓缩慢病毒的产品,使用未浓缩病毒上清与本产品低温孵育后低速离心即可获得浓缩病毒液。不同于传统的耗时耗力的超滤、超速离心法,使用本产品操作简便、快捷、安全,回收率高。
慢病毒浓缩液优势
✔ 高浓缩比:浓缩体积高达240倍,如:可将120mL的病毒上清浓缩至500uL;
✔ 高回收率:经测试,病毒的回收率高达92%;
✔ 高浓缩滴度:经测试,使用本产品浓缩后病毒滴度往往可达108或109高病毒;
✔ 高病毒活性:浓缩后病毒具有更佳的转导效果。
慢病毒浓缩液操作步骤
① 收集 48 h 和 72 h 的 293T 细胞慢病毒上清液,4℃, 2000 g 离心 10 min。
② 上清液用 0.45 μm 滤膜过滤,去除细胞碎片。【注】:滤膜需使用低蛋白吸附的纤维素醋酸酯或聚醚 砜(PES)膜。切忌用硝酸纤维素膜(NC)。
③ 按慢病毒过滤液体积:浓缩试剂体积= 4:1 比例混合,摇匀,4℃ 静置过夜,或冰上孵育至少 3 h,适当 延长孵育时间可提高慢病毒的回收率。
④ 完成孵育后,4℃,3500 g 离心 15 min,小心吸去上清液。
⑤ 用适量体积 PBS 轻轻反复吹吸病毒沉淀,重悬慢病毒。
⑥ 留少许病毒液测定滴度,其他分装后保存于-80℃。【注】:因冻融会显著降低慢病毒活性,请务必分 装保存。
慢病毒浓缩液注意事项
• 本产品仅限于科学实验研究使用,不得用于临床诊断、治疗等领域。
• 慢病毒相关实验操作请在生物安全柜内完成。
• 注意将浓缩试剂和病毒液充分混合。
• 细胞的生长状态对于病毒包装至关重要,因此需保证良好的细胞生长状态和较少的细胞传代次数。
• 病毒切勿反复冻融,如果实在需要冻融,次数尽量不要超过 3 次,每冻融一次大约有 10%左右的病毒损失,应按照每次使用的病毒量来分装,保存于-80℃。保存时间尽量不要超过 6 个月。