Anti-GFP免疫磁珠
该企业相似产品
公司前身为上海李记生物科技有限公司，成立于2015年。和元李记在2023年由和元生物和李记生物合资成立，是集研发、生产、销售为一体的国产生物试剂公司，专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供技术优秀 、方便易用、经济高效的产品，产品范围包括：细胞生物学、分子生物学、免疫学和生物化学相关的实验试剂及试剂盒。
目前在全国40余座城市均有授权代理；直接服务终端超千家，涵盖CRO、药企、高校、医院和科研院所；李记产品已帮助客户发表数百篇SCI，多篇CNS。
优势产品：蛋白Marker、EZ Trans细胞转染试剂、CCK-8、支原体快速检测试剂盒、核酸染料（GelRed/GelGreen）、EZ Protein any KD PAGE蛋白电泳试剂盒、荧光染料（Alexa Fluor 488, 555, 647,CY3, cy5）、胎牛血清、细胞凋亡检测试剂盒等。
详细信息
产品描述
Anti-GFP磁珠是粒径为200nm的纳米磁珠表面上共价结合了大量的高质量的鼠源抗GFP单克隆抗体 纳米级磁珠提供的超大比表面积，具有更多的结合位点，磁珠使用量更少，非特异性吸附率低。本产品广泛应用于细胞裂解物、细胞分泌上清、血清、腹水等样品中带有GFP标签融合蛋白的免疫沉淀（IP）或免疫共沉淀（Co-IP）。 由于采用磁性分离，使得每次IP和Co-IP可以节省40%的时间。
订购信息
产品名称 | 货号 | 规格 |
Anti-GFP免疫磁珠 | AP62L212 | 1 mL |
运输与保存
蓝冰运输。4℃保存，有效期12个月。注：避免冻融或离心磁珠。
技术参数
基质 | 硅基磁珠 |
配体 | 鼠源抗GFP单克隆抗体 |
粒径 | 200nm |
磁珠浓度 | 10mg/mL |
结合能力 | ≥ 0. 8 mg GFP标签融合蛋白/mL 磁珠 |
适用范围 |
IP，Co-IP等 |
使用方法
贴壁细胞样品：
1. 移去培养基，用PBS洗细胞两次。
2. 收集细胞至1.5 mL EP管内，按比例加入IP Lysis/Wash Buffer，同时加入PMSF等相应的抑制剂，混匀后置于冰上静置5-20 min（期间混匀几次）。
3. 4℃，12000-16000xg，10 min离心收集上清液，置于冰上以备后续实验（或置于 -80℃ 长期保存）。
表1.培养皿IP Lysis/Wash Buffer推荐使用体积
培养皿大小/表面积 | IP Lysis/Wash Buffer体积 |
100 mm x 100 mm | 500-1000 µL |
100 mm x 60 mm | 100-300 µL |
6孔板 | 100-200 µL |
悬浮细胞样品：
1. 4℃、500-1000xg、10 min，收集细胞，弃上清。
2. 用PBS 洗细胞一次，即用 PBS 将细胞团重悬，4℃、500-1000xg、5 min，收集细胞，弃上清。
3. 用预冷的IP Lysis/Wash Buffer重悬细胞。每50 mg 细胞使用500μL IP Lysis/Wash Buffer。同时加入PMSF等相应的抑制剂，混匀后置于冰上静置5-20 min（期间混匀几次）。
4. 4℃，12000 -16000xg，10 min离心收集上清液，置于冰上以备后续实验（或置于-80℃长期保存）。
血清样品：
一般建议建议用IP Lysis/Wash Buffer稀释血清样品至目标蛋白终浓度为50-150µg/mL，置于冰上备用（或置于-20℃长期保存）。
免疫沉淀：
注：为保证磁珠均匀分布，使用前通过反复颠倒或轻微涡旋混匀瓶中磁珠。
1. 将25-50µL的Anti-GFP免疫磁珠加入1.5 mL离心管中。
2. 向磁珠中加入500 µL预冷PBS，轻柔混匀。
3. 将离心管放入磁力架中收集磁珠到离心管的一边，去除上清。
4. 向离心管中加入200-500 µL IP Lysis/Wash Buffer。颠倒离心管数次或轻微涡旋混匀1 min。用磁力架收集磁珠，去除上清。
5. 将含有GFP标记蛋白加入装有磁珠的离心管中，保持混匀室温下孵育1-2 h，或4℃ 2-4 h。
6. 用磁力架收集磁珠，除去未结合的样品，保存以备分析。
7. 向离心管中加入1000 µL IP Lysis/Wash Buffer，轻柔混匀磁珠5-10min。收集磁珠，弃上清。再重复洗两次。
8. 变性洗脱：向离心管中加入80-100 µL SDS-PAGE Sample Loading Buffer（1×），将样品置于100℃水浴或者金属浴中加热10 min。通过磁力架分离磁珠，保留含有目的抗原的上清。注：如需保持蛋白活性，也可采用以下洗脱方式。
低pH洗脱：向离心管中加入100 µL Elution Buffer。保持混匀在室温下孵育离心管5-10 min。通过磁力分离磁珠，保留含有目的抗原的上清。每100 µL洗出液中加入20 µL Neutralization Buffer来中和低pH。
注意事项
1. 本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。
2. 请勿高速离心、干燥或冷冻磁珠，这些操作会导致磁珠聚集而降低结合能力。
3. IP实验中不同类型的抗体与抗原结合的亲和性是有区别的，抗体与抗原结合还会受到IP Lysis/Wash Buffer的影响，因此，如使用本实验步骤不能获得最佳的实验结果，可自行优化操作细节或者筛选及配制缓冲液进行实验，推荐使用李记生物相关试剂，详见底部。
4. 磁珠使用前应充分振荡均匀。磁珠应保存在储存溶液中，防止干燥。
相关产品推荐
1X PBS (无菌)（货号：AC08L011）
Western/IP细胞裂解液（带抑制剂）（货号：AP01L076）
蛋白示踪上样缓冲液（5 x）（货号：AP14L036）
本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。
