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SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳低分子量标准蛋白质 宝叶生物

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2012/6/14 22:04:07


SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳低分子量标准蛋白质
本公司研制的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳低分子量标准蛋白质,使用方便,效果尤佳。其分子量范围是14400~97400道尔顿。
成分:


成分
分子量(道尔顿)
含量(μg/支)
兔磷酸化酶B/Rabit phosphorglase B
97400
40
牛血清白蛋白/Bovine serum Albumin
66200
40
兔肌动蛋白/Rabbit actin
43000
40
牛碳酸酐/Bovine carbonic anhydrase
31000
40
胰蛋白酶抑制剂/Trypsin inhibitor
20100
40
鸡蛋清溶菌酶/Hen egg white lysozyme
14400
40


本产品规格:冻干粉(20次/支)
使用方法:
1、 将冻干粉产品先加200ul重蒸水溶解,再加等体积的2倍样品缓冲液混匀。在沸水浴中变性3-5分钟,分装20ul/支,入-20℃保存。使用时取一支即可上样。
2、 应经常规SDS-PAGE电泳后,用考马斯亮蓝R-250或G-250(coomassie blue R-250 or G250)染色。可得分布均匀、密度相同的6个蛋白质条带
3、 银染法:将本品以1倍样品缓冲液稀释40-50倍后分装(8ul/支)、-20℃保存。使用前取一支,100℃水浴3-5分钟即可上样。经常规SDS-PAGE后银染,可得分布均匀的6个蛋白质条带。
建议使用分离胶:14%(T)。
-2倍样品缓冲液配制:


试剂名称
成分
含量/浓度
配制方法
2倍样品
缓冲液
0.5M Tris-HCI,PH6.8
2.0ml
以上溶液混合后加双蒸水2.5ml至10.0ml,可适当调整溴酚蓝的用量以保证电泳时的*指示
丙三醇(甘油)
2.0ml
20%SDS
2.0ml
0.1%(w/v)溴酚蓝
0.5ml
2-b-巯基乙醇
1.0ml


Reagents for SDS Gels
A.      4×Lower gel buffer pH8.8
1.5M Tris         90.83g
0.4%(w/v)SDS     2.00g
dd H2O to 500ml
用浓HC1调PH至8.8
B.      4×Upper gel buffer pH6.8
0.5M Tris        12.11g
0.4%(w/v)SDS    0.8g
dd H2O to 200ml
用浓HC1调PH至6.8
C.      30% Acrylamide regular
29.2%(w/v)acrylamide     29.2g
0.8%(w/v)Bis-acrylamide   0.8g
dd H2O to 100ml
加热使acrylamide*溶解,冷却后加Bis混合溶解后定容,用滤纸过滤,装棕色瓶
D.     10×Running buffer
0.25M Tris              30.3g
1.92M Gly              144.1g
1.0%(w/v)SDS         10.0g
dd H2O to 100ml
(无需调PH)PH即为8.2-8.3
分离胶 总体积12ml   单位:ml                                浓缩胶
5%
7%
10%
11.5%
12%
13.5%
14%
15%
5%
dd H2O
7
6.2
5
4.4
4.2
3.6
3.4
3
dd H2O
4.06
4×lower
3
3
3
3
3
3
3
3
4×Up
1.68
30%Acr
2
2.8
4
4.6
4.8
5.4
5.6
6
30%Acr
1
100%TEMED
10ul
10ul
10ul
10ul
10ul
10ul
10ul
10ul
100%TEMED
5ul
10%AP
100ul
100ul
100ul
100ul
100ul
100ul
100ul
100ul
10%AP
50ul
附图一:SDS-PAGE 低分子量标准蛋白质考马斯亮蓝R-250染色结果
兔磷酸化酶B            97400道尔顿
牛血清白蛋白            66200道尔顿
兔肌动蛋白              43000道尔顿
牛碳酸酐                31000道尔顿
胰蛋白酶抑制剂          20100道尔顿
鸡蛋清溶菌              14400道尔顿


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