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ELISA法检测沙眼衣原体抗体

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2009/9/28 11:34:00

ELISA法检测沙眼衣原体抗体

 

    沙眼衣原体有3个生物学变种,其中2个与人类疾病有关,引起沙眼及包涵体结膜炎。沙眼是世界范围流行的眼病,是致盲的重要原因。此外,沙眼衣原体、人型支原体、解脲脲原体是引起人类泌尿生殖系统感染的重要病原体,尤以沙眼衣原体更重要。常用检查方法有ELISA和生物芯片法检测沙眼衣原体抗体。

    [检测方法ELISA

    [方法学原理)  在已包被沙眼衣原体抗原的微孔板孑L内,加入待测血清和HRP-抗人Ig,再加入酶底物显色。根据显色强度可判定沙眼衣原体抗体的有无及水平。

    [试剂]

    1.预包被微孔板

    2.洗涤液

    3HRP-抗人IgG

    4.阴性对照、阳性对照

    5.底物液

    6.终止液

    [仪器酶标仪或全自动酶联免疫检测仪。

    [检测步骤]

    1.从试剂盒中取出已包被沙眼衣原体抗原的微孔板和所有试剂,预温至室温。

    2.将待检血清、校准血清、阴性和阳性质控血清用稀释液作120稀释。分别加至相应的微孔内,每孔100u1。空白孔加稀释剂100ul

    3.室温环境中温育20min后用洗涤液洗3次,每次洗涤量250ul

    4.各孔分别加HRP-抗人IgGl00~1,室温环境中温育20min,同上法洗涤3次。

    5.各孔加底物溶液100rtl,室温环境中温育10min显色,每孔加终止液100gl终止反应。

    6.在酶联免疫测定仪上测定450nm波长的吸光度。

    [正常参考值沙眼衣原体抗体阴性。

    [结果判断]

    1.将吸光度用下列公式换算成ISR值:

ISR=样品的吸光度÷(校准物的平均吸光度×校正因子)

校正因子在校准血清的标签上

    2.待测血清ISR≤09为阴性。

    3.待测血清ISR值为0911. 09为可疑阳性,应重新检测或随诊。

    4.待测血清ISR≥110为阳性。

    [注意事项]

    1.每次试验均须设置阳性与阴性质控血清和校准血清测定孔。

    2.用450nm波长,试剂空白的吸光度必须<015;阴性质控血清的吸光度必须<025;阳性质控血清的吸光度必须≥050;校准血清的吸光度必须≥025

 

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