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                             解密做Elisa时温育的作用

       ELISA是酶联接免疫吸附剂测定（ Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay ）的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。此项技术自70年代初问世以来，发展十分迅速，目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域。 

      温育是ELISA 测定中影响测定成败zui为关键的一个因素。

      温育所需时间与温度成反比，即温度越高，则所需时间相对较短。zui为常用的温育温度有37℃和室温，其次是43℃和2～8℃。 温育这一步是临ELISA 测定中zui容易出现问题的步骤。通常目前国内 ELISA 商品试剂盒的反应温育时间为37℃ 30分钟～1小时， 进口ELISA 试剂盒则通常为37℃ 1～2小时才能有较*的结合，低于1小时，可能会影响测定下限。

操作注意事项

1、要保证在设定的温度下有足够的反应时间 一般来说，加完样本和（或）反应试剂后，将 微孔板从室温拿至水浴箱或温箱中时，孔内温度从室温升37℃，需要一定的时间，尤其是在 室温比较低以及非水浴的状态下，这段升温时间可能还比较长，而在临床实验室中，很少有天 室内温度较低有关，此时微孔板转入温箱后37℃温育时间不够，以致弱阳性样本测定为阴性。

2、温育温度的选择 在有的ELISA 试剂盒的说明书中，指出温育温度可有两种，例如，一种是37℃下1h，另一种则为43℃下45min。因此，我们建议在临床 ELISA 测定中尽量使用较低温育温度较长反应时间的条件。

3、在实验室的常规ELISA 测定中，将板从室温（通常在25℃左右）臵于37℃温箱， 板孔升温时，在外周孔与中心孔之间可能存在一热力学梯度。因此使用水浴或在将反应溶液加入至板孔中时，将板和溶液均加。