免疫组化操作步骤

1。处理切片

从数据库查询IHC arrangement 中查找当天的工作安排，找出相应的slide NO，于切片盒中取出放进架子中。

（1）  在二甲苯Ⅰ中30mins，在二甲苯Ⅱ中20mins; 二甲苯3中10mins;

（2）  在无水乙醇中浸泡5mins;

（3）  95%乙醇中浸泡5mins;

（4）  80%乙醇中浸泡5mins;

（5）  60%乙醇中浸泡5mins;

（6）  单蒸水中浸泡5mins。

2.抗原修复

取一定量的CB缓冲液于一耐高温容器里，放进微波炉中，power10，2mins，使之沸腾。然后把切片小心放入其中，再缓缓放入微波炉中加热，power3，5mins。完毕，放在室温自然冷却，30-40mins后，降至室温。

3.免疫组织化学染色

（1）  取出切片，TBS冲洗4-5次;甩干，擦净。加入30ul H2O2，于室温湿盒中封闭30mins;

（2）  甩干，擦净。滴加稀释好的一抗40 ul，4℃过夜;

（3）  TBST冲洗4-5次，滴加生物素化二抗20 ul，室温孵育1-2hrs;

（4）  TBS冲洗4-5次;滴加酶标亲和素20ul，室温孵育30mins;

（5）  TBS冲洗4-5次;滴加30ul substrate 着色后迅速冲洗干净;

（6）  滴加1滴hematoxylin，5-10mins;

（7）  镜检;

（8）  脱水，封片。

原文地址：http://www.fantibody.com/article/article.html?doc=161