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zui常用的双功能剂是戊二醛。它的两个醛基能与抗体（或其它蛋白质）和HRP的氨基或羟基结合，而使二者偶联在一起。常用二步标记法，即*步先使戊二醛的一个醛基与HRP的氨基结合，第二步再使戊二醛的另一个醛基与抗体的氨基结合。用此法所得的HRP-抗体结合物中，HRP与抗体皆为单体，分子量为200kD左右，抗体与酶活性保存60%左右，缺点是结合率不高。戊二醛二步法（AVrameas-Ternyck法，）具体操作步骤为：取辣根过氧化物酶10 mg溶于0.1 mol/L PBS（pH 6.8）中，配成含1.25％戊二醛溶液0.2 ml，室温放置18h。用生理盐水透析或经葡聚糖凝胶G-25除去戊二醛，用生理盐水补充至l ml。加入含5 mg抗体的生理盐水溶液l ml和l mol/L（pH9.5）碳酸盐缓冲液0.1 ml，混匀后在4℃放置24h。 加0.1 ml 0.2 mol/L赖氨酸溶液，室温中放置2h。用半饱和硫酸铵沉淀三次，透析除去硫酸铵，离心（1000 rpm，30min），取上清分装冻存，或加入等量60％甘油的PBS，4℃贮存。用前1 mg蛋白加入1 mg小白鼠肝粉末吸收，除去非特异反应物质。

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