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酶桥法：

Mason等（1969年）与Sternberger（1969年）同时报道了免疫球蛋白-酶桥法（又称夹心法或三层法）。其原理主要是利用第二抗体为桥梁，把抗原的特异性抗体与抗HRP抗体结合起来，后者再与HRP结合。HRP与其抗体形成复合物后仍保留其酶活性，可加底物显色，达到定位抗原的目的。由于在抗HRP血清中除酶抗体外，还含有非酶抗体，后者与酶抗体竞争在第二抗体上的结合点，所以抗HRP抗体必须效价高，才能保证此法的高灵敏性。为此要耗费较多的纯HRP来制备抗HRP血清。

PAP法与双PAP法：

为了改进酶桥法，Sternberger等人（1970年）又建立了可溶性酶-抗酶 抗体复合物法（简称PAP法）。他们制备了可溶性兔PAP来代替酶桥法中的zui后两个步骤，即兔抗HRP抗体与自由HRP两步。此法既可纯化酶抗体以提高方法的灵敏性，又可简化酶桥法繁多的步骤。可溶性兔PAP是大分子的复合物，含有三个分子HRP与两个抗HRP抗体，外形呈五角形，分子量429 kD，直径20.5nm。Vacca等（1980年）提出了双PAP法，既在用PAP处理组织或细胞后，重复使用一次羊抗兔IgG和PAP，zui后显色。这样可比单纯的PAP法提高灵敏性4～5倍。在用单克隆抗体做*抗体定位抗原是，桥抗体需用羊抗鼠IgG取代羊抗兔IgG，兔PAP需用鼠PAP取代。继Terngnek（1983年）之后，程明（1987年）在*先制备了鼠PAP，后者是用抗HRP的单抗隆抗体与HRP共育而制成，产物为一个抗体分子结合两个酶分子，分子量比兔PAP小很多

原文地址：http://www.fantibody.com/article/article.html?doc=218

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