健脾补肾方改善实验动物学习记忆功能的研究

　摘要　为观察健脾补肾方对实验动物学习记忆功能的影响, 采用避暗法、跳台法和水迷路法研究健脾补肾方对正常
幼龄小鼠被动反应、氢溴酸东莨菪碱所致小鼠记忆获得障碍、戊*钠所致小鼠方向辨别障碍、 400 m lö L 乙醇所致小
鼠记忆再现障碍的影响。结果表明: 健脾补肾方能减少正常幼龄小鼠 5 m in 内学习试验及记忆测验的错误次数（P <
0105, P < 0101） , 可提高戊*钠造成的方向辨别障碍模型小鼠的正确反应平均数和正确反应百分率; 亦可延长氢溴
酸东莨菪碱和乙醇所致记忆获得与再现障碍模型小鼠的记忆潜伏期, 降低 5m in 内错误次数（P < 0105, P < 0101）。这说
明健脾补肾方能增强正常动物的记忆功能, 对药物所致动物记忆障碍有改善作用, 初步显示健脾补肾方改善学习记忆功
能的药理作用。
关键词　健脾补肾方; 　学习记忆; 　记忆障碍; 　方向辨别障碍
中图法分类号　R25613, 　R74915
Ef fects of Prescr ipt ion of Bushen-J ianp i （BSJP） on the Abil it ies
of Learn ing andM emory in M ice
Huang Guangying, L u Fuer, Yang Guang et a l
Inst itu te of In teg ra ted T rad it iona l Ch inese and W estern M ed icine,
　　　T ongj iM ed ica l U n iversity , W uhan 430030
Abstract　In o rder to ob serve the effect s of Bu shen2 J ianp i （BSJP ） on the ab ilit ies of learn ing and
m emo ry in exper im en talm ice, the test s of avo idance respon se to darkness, of sp r inging to p latfo rm af ter
elect r ic st im u lat ion and of w ater lab ryn th, in no rm al young m ice, in the m emo ry2 ob tain ing distu rbed m ice
induced by scop lam ine hydrob rom ide and in the o r ien tat ion distu rbed m ice induced by pen tobarb ital sodium
as w ell as in the m emo ry2releasing distu rbed m ice induced by 400 m lö L alcoho l, w ere respect ively per2
fo rm ed1 The resu lt s show ed that BSJP cou ld sign if ican t ly reduced the er ro r t im es w ith in 5 m in in no rm al
young m ice and in dysm nesia group s （P < 0101, P < 0105） , p ro longed the incubat ion per iods of m emo ry,
great ly imp roved the average t im es and percen tages of co r rect respon se in o r ien tat ion distu rbed m ice . It is
concluded that BSJP cou ld imp rove the m emo ry ab ilit ies bo th in no rm al and in dysm nesia m ice induced by
som e exper im en talm ater ials1 It is suggested that BSJP cou ld have the pharm aceu t ical effect s of imp roving
the ab ilit ies of learn ing and m emo ry and thu sm igh t be impo r tan t in the clin ical u se in the pat ien t sw ith de2
m en t ia1
Key words　p rescr ip t ion of Bu shen2 J ianp i ; 　ab ilit ies of learn ing and m emo ry; 　dysm nesia model an i2
m al ; o r ien tat ion distu rbance
3
国家*资助项目（No. 922204）
黄光英, 女, 1945年生, 教授, 医学博士。
　　 健脾补肾方主要由黄芪、人参、制首乌、枸杞子
等组成, 具有健脾补肾、益智醒脑等功效。本实验观
察健脾补肾方对增强正常动物记忆和改善药物所致
动物记忆障碍的影响, 现将结果报道如下。
1　材料与方法
111　实验动物
昆明种幼龄小鼠, 体重16～ 18 g; 昆明种8 周龄
成年小鼠, 体重 18～ 22 g, 雌雄各半, 由同济医科大
学实验动物学部提供。
112　药物及试剂
健脾补肾方浸膏（由同济医院药剂科提供, 主要成分含黄芪、人参、制首乌和枸杞子等, 每 g 浸膏含
生药 1198 g ） , 脑复康 （东北制药厂生产, 批号
970658） , 氢溴酸东莨菪碱（广州侨光制药厂生产, 批
号 950428） , 戊*钠（上海化学试剂分装厂） , 无
水乙醇（河南焦作市化工厂生产, 批号960218）。
113　仪器
11311 小鼠避暗箱: 参照钱伯初方法[ 1 ]
改良自制而
成, 该装置为20 cm×13 cm×35 cm 的有机玻璃箱,
分明、暗两室, 两间隔板底部有一直径为 3 cm 的洞
口, 明、暗两室底部均铺以铜栅, 暗室底部的铜栅通
以36 V 的电流, 明室底部不通电。
11312 小鼠跳台仪: 参照李仪奎方法[ 2 ]
改良而成, 该
装置体积为 60 cm×12 cm×18 cm , 箱内用有机玻
璃分隔成 5 间, 箱底铺以铜栅, 与可调变压器相连,
每间左后方放置一个高度和直经均为 415 cm 的软
木塞作为跳台。
11313 小鼠“Y”型水迷路箱: 参照李仪奎方法[ 2 ]
改良
而成, 该装置体积为 100 cm×19 cm×19 cm , 从中
部分支, 一侧用黑色有机玻璃遮住光线, 称为暗道,
另一侧用 25W 日光灯照明, 称为明道, 在明道上置
一平台略高出水面。
114　学习记忆功能测定
参照文献方法[ 2, 3 ]
, 记录上述学习记忆实验过程
中动物 5 m in 内的错误次数和潜伏期, 后者为实验
开始至小鼠*次错误的间隔时间, 与学习记忆能
力成正比。
2　结果
211　健脾补肾方对正常动物学习记忆功能的影响
用避暗法, 将幼龄小鼠 50 只随机分为 5 组, 即
空白对照组、药物对照组、健脾补肾方É、 Ê、 Ë 组。
每组 10 只, 依次分别以蒸馏水 012 m lö 10g、脑复康
液 10 gö kg、健脾补肾方 1112 gö kg、 2213 gö kg 和
4416 gö kg （按核算后生药量）灌胃, 每 d 1 次, 连续
给药14 d, 给药结束后测定学习记忆功能（表1）。表1　健脾补肾方对正常幼龄小鼠被动回避反应的影响（x q±s, n= 10）
组　别 给药量
（gö kg）
学习试验
潜伏期（ s） 错误次数（次）
记忆实验
潜伏期（s） 错误次数（次）
空白对照组 等体积水 10116±1314 314±111 18918±5411 118±111
脑复康 1010 9213±1418 118±0183 3
22214±4517 112±0183
健脾补肾方É 1112 9519±2516 217±1113
22113±6912 113±1113
健脾补肾方Ê 2213 10311±2210 118±0173 3
25911±3618 019±0173 3
健脾补肾方Ë 4416 10712±3411 114±0153 3
26214±3612 017±0153 3
　　与空白对照组比较　3 P < 0105,
3 3 P < 0101
　　表 1 结果表明: 健脾补肾方É、 Ê、 Ë 组及脑复
康组均能明显减少正常幼龄小鼠学习试验及记忆测
验的错误次数, 提示健脾补肾方对正常幼龄小鼠的
学习记忆有一定的促进作用。
212　健脾补肾方对记忆障碍动物学习记忆功能的影响
21211 健脾补肾方对氢溴酸东莨菪碱所致小鼠记忆
获得障碍的影响: 选合格昆明种小鼠 60 只, 随机分
为 5 组, 每组 10 只, 健脾补肾方É、 Ê、 Ë 组剂量同
上; 空白对照组与模型组给对照液蒸馏水 012 m lö
10 g 体重, 阳性对照组给脑复康 10 gö kg, 各组每天
分别灌胃1 次, 连续给药14 d。于第15 d 给药后4 h
进行跳台训练, 训练前 15 m in ip 氢溴酸东莨菪碱
2 m gö kg, 对照组注射等容量生理盐水。按分组分批
将小鼠放入跳台仪, 先适应 3 m in, 然后通电, 小鼠
受电击后跳上跳台, 避免电击。训练 5 m in 并记录
5 m in内触电次数, 为错误反应次数。24 h 后重新测
试, 记录5 m in 内触电次数和*次触电潜伏期（表
2）。
表2　健脾补肾方对氢溴酸东莨菪碱所致小鼠记忆障碍的影响（x q±s）
组　别 给药量（gö kg） 东莨菪碱（mgö kg） 潜伏期（s）　 5 m in 内错误次数（次）组　别 给药量（gö kg） 东莨菪碱（mgö kg） 潜伏期（s）　 5 m in 内错误次数（次）
对照组 对照液 生理盐水 24713±5818 015±015
模型组 对照液 2 10611±4912△ 119±018△
脑复康 1010 2 23511±59153
019±0193
健脾补肾方É 1112 2 19418±43143 3
110±0153
健脾补肾方Ê 2213 2 22719±66133 3
017±0173 3
健脾补肾方Ë 4416 2 23614±57113 3
014±0153 3
与模型组比较 3
　P < 0105,
3 3
　P < 0101; 与对照组比较 △ 　P < 0101
　　表 2 结果表明: 模型组与对照组比较, 模型组潜
伏期显著缩短, 5 m in 内跳下次数显著增多, 说明氢
溴酸东莨菪碱造成了记忆障碍。健脾补肾方大、中、
小剂量组及脑复康组与模型组比较, 潜伏期显著延长, 5 m in 错误次数降低, 说明健脾补肾方对氢溴酸
东莨菪碱所致小鼠记忆获得障碍有改善作用。
21212 健脾补肾方对 400 m lö L 乙醇所致小鼠记忆
获得障碍的影响: 分组及给药同上一实验。采用避暗
法[ 1 ]
, 第 15 d 于给药后 1 h 开始训练、 24 h 后测试,
在测验前 30 m in 分别灌胃 400 m lö L 乙醇 011 m lö
10g, 对照组灌等量生理盐水, 测定时将小鼠放入明
箱, 记录小鼠放入明箱到进入暗箱的潜伏期及 5
m in 内错误次数为记忆指标（表3）。
表3　健脾补肾方对400 m lö L 乙醇所致小鼠记忆再现障碍的影响（x q±s）
组　　别 给药量 （gö kg）
400 m lö L 乙醇 （011 m lö 10 g）
潜伏期　　 （s）　　
5 m in 内错误　
次数（次）　
对照组 1010 生理盐水 20219±6219 110±017
模型组 1010 011 4012±1411△ 317±112△
脑复康 1010 011 9114±24193
210±0173
健脾补肾方É 1112 011 14516±34133 3
119±0183
健脾补肾方Ê 2213 011 18617±53103 3
115±0173 3
健脾补肾方Ë 4416 011 14814±37103 3
118±0183
　　与模型组比较 3
P < 0105,
3 3
　P < 0101; 与对照组比较 △P < 0101
　　 表 3 结果表明: 模型组与对照组比较, 潜伏期
明显缩短, 5 m in 内错误次数增加, 说明小鼠按 011
m lö 10 g 体重给 400 m lö L 乙醇已造成记忆再现障
碍。给药组与模型组比较, 潜伏期延长, 5 m in 内错
误次数减少, 说明健脾补肾方对记忆再现障碍有较
好改善作用。
端尾对“Y”型叉口轻放入水中, 以其在 15 m in 内抵
达平台为正确反应, 休息 15 m in 后重复训练, 每天
训练 10 次, 连续 5 d, 训练过程中继续药物灌胃, 以
各组小鼠每天平均反应百分率和正确反应平均数为
指标, 实验结果见表 4 （数据为 5 d 训练的平均数）。
结果表明, 模型组每天正确反应平均数和百分率均21213 健脾补肾方对戊*钠所致小鼠方向辨别
障碍的影响: 分组给药同上一实验。训练与测试采用
水迷路法[ 2 ]
, 于给药 14 d 后开始训练。水深约
10 cm ,水温保持在（25±1） ℃左右。每天训练前30
m in 模型组和给药组分别 ip 注射戊*钠 115
m gö kg, 对照组 ip 等量生理盐水。每批实验每组 2
只, 经30 m in 后第2 批给药。训练时将小鼠从长臂
低于空白对照组, 有非常显著性差异（P < 0101）
明造模成功; 健脾补肾方大、中、小剂量组及脑复
组正确反应平均数和百分率与模型组比较均有
加, 亦呈非常显著性差异（P < 0101） , 表明健脾补
方对戊*钠所致小鼠方向辨别障碍有改善
用。
表4　健脾补肾方对戊*钠所致方向辨别障碍的影响
组 别 给药量
（gö kg）
戊*钠
（mgö kg）
正确反应平均数
（次）
正确反应百分率
（% ）
对照组 对照液 生理盐水 515 55
模型组 对照液 115 219△ 29△
脑复康 1010 115 6193 3
693 3
健脾补肾方É 1112 115 5183
583
健脾补肾方Ê 2213 115 7113 3
713 3
健脾补肾方Ë 4416 115 6163 3
663 3
　　与模型组比较 3
P < 0105, 　　3 3
P < 0101; 与对照组比较 △P < 0101
213　健脾补肾方对小鼠胆碱脂酶活性的影响
分组给药方法如上, 眼球摘除取血, 取血后断头
处死, 迅速取出全脑, 放入冰冷的生理盐水中冲洗,
表5　健脾补肾方对小鼠全脑胆碱脂酶
活性的影响（x q±s）　　 　取脑组织 100 m g, 用 011 mo lö L pH 714 PBS 制成
匀浆, 改良 Ellm an 法测定小鼠全脑胆碱脂酶活
力[ 4 ]
。表5 结果表明: 健脾补肾方大、中、小剂量组与
模型组比较, 胆碱脂酶活性显著降低, 说明健脾补肾
方对氢溴酸东莨菪碱所致小鼠胆碱脂酶活性增加有
一定抑制作用。
组 别 （gö kg） （mgö kg） （Uö g 脑组织）
对照组 N S N S 79109±7111
模型组 N S 2 91157±9184
健脾补肾方É 1112 2 83125±81393
健脾补肾方Ê 2213 2 61105±101283 3
健脾补肾方Ë 4416 2 59166±51743 3
　与模型组比较 3
P < 0105, 　3 3
P < 01013　讨论
典型的反转回复（ IR ）序列包括一个 180°射频
脉冲和一个 90°脉冲。在 IR 序列中 180°脉冲到 90°
脉冲之间所经过的时间称反转回复时间（T I）。IR 序
列依其T I时间的不同分为以下 3 类: ①长T I : 1500
～ 2000 m s, 为液体衰减反转回复脉冲序列, 又称为
FLA IR （F lu id A t tenuat ion IR ）序列, 是通过 IR 法
获得的T 2 加权像。②中长T I : 1500～ 700 m s, 为标
准的 IR 序列。③短T I : 100～ 150m s, 为本文所介绍
的 IR 方式: FM P IR （FastM u lt ip lanar IR ）或 ST IR
（Sho r t T im e IR ）序列[ 3 ]
。
FM P IR 序列采用短时间 T I使脂肪的纵向磁
化矢量到达标轴的零点时, 给予 90°脉冲, 在较短的
TE 时间内进行信号采集, 这时的脂肪磁化矢量几
乎等于 0, 故FM P IR 序列所采集的信号中不含脂肪
组织信号, 从而达到抑制脂肪的目的[ 2 ]
。
大部分病变组织富含水成分, 在MR 图像中呈
长T 1、长T 2 表现, 如肿瘤、炎性渗出、出血骨折等。
而 FM P IR 序列对这类含水组织极为敏感, 表现为
*信号, 使病变凸显。所以FM P IR 序列对所有病
与 SE 序列相比, FM P IR 序列也有其缺点。首
先, 信噪比较低, 空间分辨率较差, 背景的显示也不
如SE 序列清晰。其次, 所有病变组织信号均为高信
号,不利于病灶的定性[ 1 ]
。尽管FM P IR 序列具有上
述缺点, 但因其对病灶的高敏感性, 脂肪抑制、短时
间、多方位的采集方式等诸多优点[ 6 ]
, 在骨关节MR
检查中, 可作为SE 序列的重要补充[ 4 ]
。
参　考　文　献
1　翟邵华, 周燕发, 王承缘等 1ST IR 序列在胸部MR 检查
中的应用1中国医学影像技术, 1997, 13 （增刊） : 4
2　彭振军主编, 影像磁共振成像技术, 武汉: 湖北科学技术
出版社, 1997130～ 33
3　陈　忠, 苏荣森 1FLA IR 序列在脑部MR I的应用初探
临床放射学, 1997, 16 （4） : 201
4　贺　涓, 廉宗徵 1 骨髓疾病的磁共振成像 1 国外医学临
床放射分册, 1996, 19 （6） : 325
5　Sundaram M. M cleodMR imaging of tumo r and tomo
like lesions of bone and sof t t issue . AJR, 1990, 155 （4）
817
6　于　群, 刘定西, 曾祥阶等1磁共振快速扫描技术在脊柱
扫描中的应用 1临床放射学, 1995, 14 （2） : 106
（1998203223　收稿）　　（上接第 75 页）
3　讨论
中医理论认为,“脾为先天之本, 气血生化之
源” ;“肾主骨生髓”、“脑为髓之海”。临床所见脾肾亏
虚患者多有智能衰退的表现, 乃因气血亏损、心脾两
虚而致神明失养; 肾精不足, 髓海空虚而致心脑失
用, 从而均可引起学习记忆功能的下降。健脾补肾方
为我研究所根据中医理论并结合自己的临床经验而
拟定的治疗老年虚证患者记忆力减退的协定处方,
临床观察表明该方具有补养心脾、填精固肾、安神益
智等功效。为了探讨健脾补肾方的药理作用机制, 我
们进行了有关健脾补肾方对改善动物学习记忆作用
的实验研究。本研究除了观察健脾补肾方对正常动
物记忆影响外, 并采用了氢溴酸东莨菪碱、乙醇、戊
*钠造成学习记忆障碍和方向辨别障碍等动物
模型, 观察其对学习记忆和空间识别的影响。研究结
果发现, 不同剂量的健脾补肾方不仅能增强正常幼
龄小鼠的学习记忆能力, 而且能明显对抗氢溴酸东
莨菪碱对小鼠记忆获得的破坏、乙醇对小鼠记忆再
现的缺失和戊*钠对小鼠中枢神经的抑制, 并
能抑制中枢神经系统胆碱脂酶的活性。其改善学习
记忆和对方向辨别障碍的作用可能与兴奋中枢神经
系统, 尤其与兴奋胆碱能神经有关。健脾补肾方可能
通过作用于中枢胆碱能神经而起到改善学习记忆的
作用。
参 考 文 献
1　钱伯初 1 蜂花粉改善学习记忆功能的实验研究 1 中药药
理与临床11988, 4 （1） : 19
2　李仪奎, 王钦茂, 周金黄等 1 中药药理实验方法学 1 上
海: 上海科学技术出版社, 19911172～ 175
3　徐秋萍, 孙建宁, 朱承喜等 1 复方党参对*钠引起小
鼠方向辨别障碍的改善作用 1 中药药理与临床, 1989,
（2） : 25
4　袁伯俊, 秦伯益 1 环苯砜对乙酰胆碱脂酶的抑制作用
中国药理学报, 1990, 11 （2） : 126
（1998206223　收稿）
剂量 东莨菪碱 胆碱脂酶活性