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2013/5/6 0:05:05酶联免疫吸附试验
酶联免疫吸附试验 (又称酵素免疫分析法 ,Enzyme-linked immunosorbent assay,簡稱ELISA )利用抗原 抗體之間專一性鍵結之特性,對檢體進行檢測;由於結合於固體承載物(一般為塑膠孔盤)上之抗原或抗體仍可具有免疫活性 ,因此設計其鍵結機制後,配合酵素呈色反應,即可顯示特定抗原或抗體是否存在,並可利用呈色之深淺進行定量分析。 酶联免疫吸附试验 (又称酵素免疫分析法 ,Enzyme-linked immunosorbent assay,简称ELISA )利用抗原 抗体之间专一性键结之特性,对检体进行检测;由于结合于固体承载物(一般为塑胶孔盘)上之抗原或抗体仍可具有免疫活性 ,因此设计其键结机制后,配合酵素呈色反应,即可显示特定抗原或抗体是否存在,并可利用呈色之深浅进行定量分析。 根據待測樣品與鍵結機制的不同,ELISA可設計出各種不同類型的檢測方式,主要以三明治法( sandwich )、間接法( indirect )、以及競爭法( Competitive )三種為主,以下為各種方法之介紹。根据待测样品与键结机制的不同,ELISA可设计出各种不同类型的检测方式,主要以三明治法( sandwich )、间接法( indirect )、以及竞争法( Competitive )三种为主,以下为各种方法之介绍。
三明治法常用於檢測大分子抗原,一般之操作步驟為:三明治法常用于检测大分子抗原,一般之操作步骤为:
三明治法分別以兩種抗體對檢體中的抗原進行兩次專一性辨認,因此專一性相當高,但此待測抗原必須是多價抗原,如此才可獲得兩種以上的專一性抗體,以分別進行夾心;而且此法需要足夠的表位空間以進行抗原抗體的夾心,所以並不適用於半抗原或小分子抗原等分子量較小之標的。三明治法分别以两种抗体对检体中的抗原进行两次专一性辨认,因此专一性相当高,但此待测抗原必须是多价抗原,如此才可获得两种以上的专一性抗体,以分别进行夹心;而且此法需要足够的表位空间以进行抗原抗体的夹心,所以并不适用于半抗原或小分子抗原等分子量较小之标的。
間接法常用於檢測抗體,一般之操作步驟為:间接法常用于检测抗体,一般之操作步骤为:
競爭法是一種較少用到的ELISA檢測機制,一般用於檢測小分子抗原,其操作步驟為:竞争法是一种较少用到的ELISA检测机制,一般用于检测小分子抗原,其操作步骤为:
當需要偵測無法獲得兩種以上單一性抗體的抗原,或是不易得到足夠的純化抗體以固著於孔盤上時,一般會考慮使用競爭法ELISA。当需要侦测无法获得两种以上单一性抗体的抗原,或是不易得到足够的纯化抗体以固着于孔盘上时,一般会考虑使用竞争法ELISA。
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