注意事项
（1）聚苯乙烯微量反应板应选择高质量,非特异性吸附小的产品，包被物应具有较高的纯度，其浓度一般在1-100ug之间，在偏碱条件下仪吸附于反应板的凹孔中，4℃放置过夜较理想，若暂时不用，可加入终浓度为0.02%NaN3，4℃贮存，也可倾去包被液，干燥后置硅胶干燥器中，温室存放3个月以上不影响测定效果。
（2）反应各不均应充分洗涤，以除去残留物，减少非特异性吸附。为使结构重复应固定洗涤次数及放置时间，切忌相互污染。
（3）为使显色反应便于比较，显色后置室暗处的时间应一致，终止反应3-5min后应立即比色。必要时可设阳性对照，以固定显色及终止时间。北京雅安达生物免费代测ELISA试剂盒
（4）待测抗体或抗原与酶标抗体应具有相同的免疫特异性，否则无法结合。
免疫酶技术（immunoenzymatic techniques） 利用特殊的交联剂研制出辣根过氧化物酶---人血清白 蛋白及酸性磷酸酯酶---抗体,统称为酶标记物或酶结 合物,用于抗原或抗体的示踪,定位或定量测定 酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay 简称为elisa）-----是在免疫酶技术（immunoenzymatic techniques）的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技 术.本法兼有灵敏度高和特异性强两方面的优点.
elisa原理
elisa是以免疫学反应为基础，将抗原、牽9体的特异性反应与酶对底物的催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体──聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。在实际应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。即:用于检测抗体的间接法、用于检测抗原的双抗体夹心法以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。比较常用的是elisa双抗体夹心法及elisa间接法。
基本原理
免疫酶技术:酶标Ab/Ag,酶结合物的酶在免疫反应后, 作用于厎物后显色,根据颜色的有无和深浅,定量测定 Ab/Ag.
免疫反应:一次或数次 具Ag,Ab特异的免疫学反应
酶促反应:只进行一次 免费代测ELISA试剂盒一周内出结果雅安达生物
显示出生物放大作用,灵敏度ng,pg
操作方法包被特异性抗原:固体抗原（如蛋白质）用包被液稀释至10Oμg/ml,
包被特异性抗原 每凹孔加100μL,加盖置4℃过夜（37 ℃ 2h）,次日倾去凹孔内液体, 用滴管取洗涤液在每孔中加3～4滴,静置3min后倾去,重复3次,将反 应板扣放在滤纸上,以除净液体.
封闭 每孔中加入200-400μL封闭液,加盖或用封口膜封板,置 37℃恒温箱60min,倾去孔内液体,按上法洗涤3次.
加待测血清（内含抗体）,阴性血清（无抗体）及稀释液 （PBS/Tween）: PBS/Tween） 待测血清按倍比法用稀释液稀释（1:100,1:200等）,阴性血清也稀释 成1:100,取不同稀释度的待测血清,阴性血清及稀释液（PBS/Tween） 各1OOμL加至相应的凹孔中,加盖或封板,置37℃恒温箱1h,使抗体 与固相抗原进行特异性结合,反复洗涤3次.
加酶标抗体:按说明书要求用稀释液稀释HRP-抗体（抗抗体）,每孔加l00μL,封板后置37℃温育lh,按上法至少洗涤5次,zui后 用蒸馏水洗涤2次,扣在滤纸上吸干水分.
显色 每孔加入OPD应用液1OOuL,反应板置室温暗处5～30min.当显示橙色时应及时终止反应. 北京雅安达生物免费代测ELISA试剂盒
终止反应:每孔加入5OμL 2mol/L H2SO4.稳定3～5min即可比色测定.
检测: 用酶联免疫测定仪,以PBS/Tween孔为对照,测波长为 49Onm时各孔光吸收（A）.
1. 计算阳性血清与阴性血清A值之比（Positive/negative,P/N）, 当P/N≥2.1时为阳性,P/N<2.1而≥1.5为可疑,P/N<1.5为阴 性.用目测法则以较阴性对照深色的zui高稀释度作为抗体效价. 2. 用"+""-"表示,超过规定吸收值（0.2-0.4）的标本均 属阳性.
