基因枪的使用操作方法-上海坤科

 1。材料准备

在9cm2培养皿上铺一薄层培养基，把材料（一般用未成熟胚、成熟胚、小愈伤组织、悬浮细胞、原生质体等）平铺于培养皿中心，直径在3cm范围内。
2．金粉的处理
取60mg金粉或钨粉置于离心管中，加入lml无水乙醇，充分振荡3min，以9615g离心1rain，去上清，再加入lml无菌水充分混匀后，以9615g离心，重复上述步骤3次。zui后，将金粉悬浮于lml无菌蒸馏水中，置4‘C或室温下储存。
3．DNA的处理
取50tA金粉悬浮液，依次加入5rd的质粒DNA（1．0／lg～1）溶液、50／／l 0．1mol／L亚精胺（所用的溶液经无菌消毒），振荡3rain后，在室温下放置10min，以9615g离心10s，弃去上清液；加入250~1无水乙醇，振荡后以9615g离心10s，弃上清液。沉淀重新悬浮于60／1l无水乙醇中，可供5枪（每枪10~1）使用。
4．基因枪的操作
基因枪的所有操作均在无菌条件下进行，具体步骤如下：
1）先用70％乙醇对基因枪表面及样品室进行消毒。同时，用70％乙醇将阻挡网和可裂圆片，微弹载体及其固定器、固定工具浸泡15min后，放在超净台上晾干。可裂膜片、固定盖、微弹载体发射装置可用70％乙醇进行表面灭菌，吹干。
2）将微粒载片嵌入固定环中，取DNA及金粉的混合物加于微粒载片中心，干燥lmin左右。
3）安装可裂膜于其托座上，顺时针拧到气体加速器上。
4）将空间环、阻挡网、阻挡网托座、微粒载片及固定环（带有微粒的面朝下）安装好，旋紧盖子，插入抢中。
5）把样品放在轰击室中，关好门。
6）打开氦气瓶的总阀，顺时针转氦气调节阀，使氦压表指针的示数高于可裂膜压力200Psi（＝1．379MPa）。
7）打开基因枪及变压器开关。
8）按动真空键，待真空度至26—28in Hg（＝88．05～94．82kPa）时，迅速按下Hold键，接着按住发射键，并保持不动，直到激发为止。
9）按通气键待真空表归零后，取出样品。
10）关机。
把氦气瓶的总开关旋紧，打一次空枪，把氦压表指针归零后，再逆时针旋转氦压表调节阀；关闭基因枪的总开关及变压器开关。