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2013/7/16 13:46:48实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人晚期糖基化终末产物 (AGEs)水平。用纯化的人晚期糖基化终末产物 (AGEs)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入晚期糖基化终末产物 (AGEs),再与HRP标记的晚期糖基化终末产物 (AGEs)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的晚期糖基化终末产物 (AGEs)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人晚期糖基化终末产物 (AGEs)浓度。
试剂盒组成
1 | 30倍浓缩洗涤液 | 20ml×1瓶 | 7 | 终止液 | 6ml×1瓶 |
2 | 酶标试剂 | 6ml×1瓶 | 8 | 标准品(960pg/ml) | 0.5ml×1瓶 |
3 | 酶标包被板 | 12孔×8条 | 9 | 标准品稀释液 | 1.5ml×1瓶 |
4 | 样品稀释液 | 6ml×1瓶 | 10 | 说明书 | 1份 |
5 | 显色剂A液 | 6ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 2张 |
6 | 显色剂B液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1个 |
操作方法:
1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
480pg/ml | 5号标准品 | 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液 |
240pg/ml | 4号标准品 | 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 |
120pg/ml | 3号标准品 | 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 |
60pg/ml | 2号标准品 | 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液 |
30pg/ml | 1号标准品 | 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液 |
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置
4. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:用封板膜封板后置
8. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。