电镜免疫胶体金―胶体银染色法 江苏泰诺源

   电镜胶体金―胶体银染色(immunogold-sliverstaining)法系20世纪80年代创立的将免疫金染色和银显影2者结合而形成的一种新型检测技术，可用于电镜包埋前染色，Ted pella 胶体金和Ted pella胶体银能*使用需求。
   Ted pella 胶体金是一种常用的标记技术，是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术，有其*的优点。近年已在各种生物学研究中广泛使用。在临床使用的免疫印迹技术几乎都使用其标记。同时Ted pella 胶体金在流式、电镜、免疫、分子生物学以至生物芯片中都可能使用到。
   胶体金―胶体银染色法基本原理是*行免疫胶体金染色标记抗原，使其结合在组织细胞抗原所在位置，然后进行物理显影，当显影剂中的对苯二酚将银离子还原成银原子时，后者将围绕金颗粒形成一个“银壳”。“银壳”本身亦具有催化作用，进一步促使更多银离子还原，则使“银壳”越来越大，抗原位置因此而变得清晰，抗原信号也得以放大，故此法是zui为敏感的细胞化学方法之一。因金颗粒的电子密度高，加之敏感性也高，故特别适合免疫电镜的抗原研究。

电镜胶体金―胶体银染色法主要操作程序如下：
1. 组织固定后，5%、10%和20%系列浓度的蔗糖处理，制作冰冻切片，厚10～30gm；
2. 含1%正常羊血清或1%BSA的PBS室温孵育20分钟，封闭抗体非特异性结合部位；
3. 含1%氢硼化钠的PBS孵育20分钟；
4. *抗体孵育，可先置4℃，12～18小时，然后室温1小时，使抗体充分渗透并结合；
5. PBS漂洗3次，每次5分钟；
6. 0.1% BSA/PBS液(pH 8.2)漂洗5分钟，为胶体金结合提供碱性环境；
7. 胶体金标记的第二抗体(pH 8.2)室温孵育30～45分钟，需摸索*稀释度；
8. 硝酸银液避光处理2―10分钟，显影时间根据实验结果确定；
   溶液配制方法：
   硝酸银液配制：双蒸水60ml，枸橼酸缓冲液10ml，对苯二酚1.0g溶于30ml双蒸水，将三者混合，*溶解后，用前加入硝酸银液2.0ml(含35mg硝酸银)混匀；
   枸橼酸缓冲液的配制：枸橼酸(C6 H8O-7H2 O)25. 5g，枸橼酸三钠(NaC6H5O7 2H2 0)23.5g，用双蒸水溶解至100ml，即为pH 3.5的枸橼酸缓冲液。
9. 解剖显微镜下选取免疫反应阳性部位。1%OsO4后固定30分钟，双蒸水漂洗；
10. 组织标本的脱水、树脂包埋、超薄切片制作及电镜观察等方法同前述。

电镜胶体金―胶体银染色法主要优点：
该方法形成的金银颗粒电子密度高，反差强，敏感度高；包埋前染色的标本可在解剖显微镜下选取阳性部位，结合半超薄切片的应用，能明显提高工作效率，特别适于抗原含量少的组织细胞的免疫电镜研究。缺点：显影处理需在暗室进行，操作较繁琐；而且增加包埋前免疫染色处理的步骤易导致非特异性着色；另外，单个金颗粒周围结合的银粒子不甚牢固，漂洗等处理容易脱离，半定量研究时应注意；此外银等废液直接流人下水道，容易导致环境污染。

江苏泰诺源生物技术有限公司代理销售Ted pella 胶体金，Tedpella胶体银，以及Ted pella全线电镜耗材，订购。