培养细胞时的观察检测方法

培养细胞时的观察检测方法

一、活细胞的观察检测方法
细胞在体外培养过程中需要每天观察，以便及时了解细胞生长状态、数量改变、细胞形态、细胞有无移动、有无污染、培养液pH是否变酸、变黄、是否更换等。
细胞常规检查的方法为：
肉眼观察
相差显微镜观察

1.肉眼观察
一般常规检查用肉眼即可观察，主要看培养液的颜色和透明度的变化

大多数细胞适于在pH 7.2～7.4条件下生长，低于pH 6.8或高于pH 7.6对细胞有害，甚至造成细胞退化或死亡。细胞对碱性不如对酸性的变化耐受，偏酸的条件比偏碱的环境对细胞生长有利。
随细胞数量的增多、代谢加强，释放CO2增多，使pH 降低。为了维持培养基恒定的pH ，多在培养基中加入磷酸盐等缓冲剂。
哌嗪乙硫磺酸（Hepes）：对细胞无毒性，也不起缓冲作用，主要作用是防止pH迅速变动，在开瓶通气培养或活细胞观察时能维持较恒定的pH值。
若培养瓶、瓶塞漏气， 使CO2溢出，或者由于洗刷不洁、残留碱性物，使培养液变碱发红，致使细胞难以生长，甚至死亡。

玻璃器材
常用的玻璃器材有各种规格的玻璃瓶、培养瓶、培养皿、吸管、离心管。
使用：
自来水刷洗→0.1％稀盐酸浸泡→自来水冲洗
重复使用的处理步骤：
自来水刷洗→硫酸－重铬酸钾浸泡→自来水冲洗10次→单蒸水冲洗3次→双蒸水冲洗2次 晾干、包装 121℃高压蒸汽灭菌20min

2.显微镜观察

相差显微镜（phase contrast microscope）
活细胞对光线是透明的，光线通过活细胞时，波长和振幅几乎没有改变，所以用普通光镜无法看清未经染色的活细胞。