苏州千舍生物教你六招使用ELISA试剂盒
一、实验原理
用于免疫酶技术的酶有很多，如过氧化物酶，碱性磷酸酯酶，β－Ｄ－半乳糖苷酶，葡萄糖氧化酶，碳酸酐酶，乙酰胆碱酯酶，6－磷酸葡萄糖脱氧酶等。常用于ELISA法的酶有辣根过氧化物酶，碱性磷酸酯酶等，其中尤以辣根过氧化物酶为多。由于酶摧化的是氧化还原反应，在呈色后须立刻测定，否则空气中的氧化作用使颜色加深，无法准确地定量。
辣根过氧化物酶（HRP）是一种糖蛋白，每个分子含有一个氯化血红素（protonhemin）区作辅基。酶的浓度和纯度常以辅基的含量表示。氯化血红素辅基的大吸收峰是403nm，HRP酶蛋白的吸收峰是275nm，所以酶的浓度和纯度计算式是（已知HRP的A（1cm 403nm 1%）＝25，式中1％指HRP百分浓度为100ml含酶蛋白1g，即10mg/ml，所以，酶浓度以 mg/ml 计算是HRP的A（1cm 403nm mg/ml=2.5）HRP纯度（RZ）=A403nm/A275nm纯度RZ（Ｒeinheit Zahl）值越大说明酶内所含杂质越少。高纯度HRP的RZ值在3.0左右，高可达3.4。用于ELISA检测的HRP的RZ值要求在3.0以上。
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说到ELISA试剂盒，相信科研朋友们都不会陌生。ELISA试剂盒的诞生，是为了帮助科研工作者省掉繁琐的实验过程，提高科研效率。如果选对了试剂盒，用对了实验技巧，就会让您的实验效率事半功倍。将为您解析ELISA试剂盒六大使用技巧，请收下！
1、查找待测样本的蛋白浓度：可以通过NCBI的文献，uniprot，pax-dab上给出的蛋白表达量参考值来比较ELISA试剂盒中给出的样本值与报道值是否一致；
2、试剂盒的应用种属、检测样本的种类：除试剂盒特别说明外，一般不同种属不能通用。常见待测样本种类有：血清和血浆（不同抗凝剂），细胞上清，和细胞裂解液，试剂盒中不同样本的稀释液不混用；
3、试剂盒的检测范围：也就是标曲范围，特别要注意待测样本浓度是否落在标曲范围内，对于浓度很高的样本，可以先进行预实验摸索到比较好的稀释倍数后再大量测定样本。
Hyclone胎牛血清SH30084.03 、Hyclone胎牛血清SH30406.02 、Hyclone胎牛血清SH30406.05 、Hyclone胎牛血清SH30396.03 、Hyclone胎牛血清SH30070.03、Hyclone胎牛血清 SH30370.03 、活性炭/葡聚糖胎牛血清 SH30068.03 、马血清SH30074.03 、乌拉圭胎牛血清 SV30087. 03 、Hyclone胎牛血清SH30071.03 、Hyclone胎牛血清SV30160.03。
BOVOGEN胎牛血清 SFBS 、BOVOGEN新生牛血清 SNCS。
BI优等胎牛血清 04-001-1ACS 、BI ES级别胎牛血清 04-002-1A 、
BI 间充质胎牛血清 04-400-1A 。
PAN胎牛血清FBS P30-3302 、PAN胎牛血清FBS ST30-3302 、PAN ES级别胎牛血清 ST30-2602 、PAN胎牛血清Plus ST30-3302P 。
NTC优等胎牛血清 SFBE。
Gemini优等胎牛血清 900-108 、Gemini特级胎牛血清 100-500 、Gemini科研用人AB血清100-512 。
SBI 无外泌体血清 EXO-FBS-50A-1、双抗15140-122、SV30010 、胰酶 25200-056、SH30042.01 、GIBCO 胰酶 25200-072。
4、试剂盒中的稀释线性及回收率：
A、稀释线性一般指样本稀释线性，是将样本梯度稀释下来，看各稀释梯度浓度是否成线性，参考样本稀释线性可以选择样本的稀释倍数；
B、稀释线性也有做加标稀释线性的情况，加标稀释线性是将标准品加入样本中测定加入的标准品浓度测定是否准确，同样也是确定待测样本稀释倍数的参考指标。一般线性和回收率的范围在80%-120%比较合适；
5、试剂盒的其它指标：
A、灵敏度：试剂盒能够检测到的样本zui低浓度的能力，如果待检指标含量很低，需要选择高灵敏度的ELISA试剂盒；
B、板间和板内的变异系数（CV%）:反映板内和不同板之间是否均匀，CV%一般小于10% 比较好。
6、试剂盒的有效期：试剂盒的有效期一般是半年至一年，样本准备时间需要考虑到试剂盒的有效期。
我公司ELISA试剂盒，均经过充分测试，以保证*的品质和可重复性。这种即用型的ELISA试剂盒，含有ELISA实验所需的全部试剂和耗材，并通过精心挑选抗体对，及优化配方稀释液，确保结果具有无以伦比的准确性。如果您对我公司的胎牛血清、人血清、人AB血清、无外泌体血清SBI、新生牛血清等产品感兴趣，欢迎咨询订购！
