饱和酚的介绍

市售酚中含有醌等氧化物，这些产物可引起磷酸二酯键的断裂及导致RNA和DNA的交联，应在160℃用冷凝管进行重蒸。重蒸酚加入0.1%的8-羟基喹啉(作为抗氧化剂)，并用等体积的0.5mol/L Tris·Cl (pH8.0)和0.1mol/L Tris·Cl(pH8.0)缓冲液反复抽提使之饱和并使其pH值达到7.6以上，为Tris饱和酚（pH7.8左右）。

饱和酚在核酸纯化中有2种，一种为Tris饱和酚（pH7.8左右），故也称为碱性酚。另一种就是酸性酚，也就是水饱和酚。用于RNA提取时，则要制备酸性酚，也就是水饱和酚，因为在酸性条件下，RNA被分配于水相，而DNA在有机相，从而达到分离获得RNA的目的。水饱和酚同时能使蛋白质变性、沉淀，从核酸提取液中将蛋白质分离除去。因此，pH值不同，应用不同，切不可弄混，以免造成实验失败。

Tris饱和酚一般PH大于7.8，用于DNA的提取。其中，酚是强的蛋白变性剂，可以使细胞或组织中的蛋白质变性析出。 而Tris的主要作用是防治止酚类氧化，若酚类氧化，则会形成醌（两个苯环），醌含有强自由基，会破坏核酸结构。 同时，由于PH值大于7，在碱性环境中DNA处于水相，RNA处于有机相。从而分离上清，即可得到DNA。

Tris饱和酚的配置：

1、冰箱取出重蒸酚，室温放置--－68度水浴溶化，切勿立即放入68度的水浴中，以防玻璃炸裂

2、加8－羟基喹啉至0.1％和β－巯基乙醇至0.2％，（原液14. 4MOL/ML），混匀，溶液呈现黄色，倒入分液漏斗中（也可在烧杯中进行）

3、加入等溶剂的1MOL/ML的Tris(PH8.0),反复混匀后，静至分层；放出下层黄色酚液，弃上层

4、加固体Tris约1g/100ml酚，摇匀，去水相

5、加0.1MOL/MLTris(PH8.0)平衡数次，至PH为8.0

6、加0.1MOL/MLTris(PH8.0)于棕色瓶中4度保存

7、如黄色消失或呈粉红色（说明酚已经被氧化），则不能使用