技术文章

原代细胞复苏的基本操作方法及其常用耗材介绍

重庆市华雅干细胞技术有限公司 >> 进入商铺

2015/5/25 10:58:38
 一、实验准备
 
      (1)仪器:净化工作台、离心机、恒温水浴箱、倒置相差显微镜、培养箱、液氮冰箱
      (2)玻璃器皿:吸管(弯头、直头)、培养瓶、玻璃瓶(250ml、100ml)、废液缸
      (3)塑料器皿:吸头、枪头、胶塞、移液管(10ml)、15ml离心管、冻存管(1~2ml)
      (4)其他物品:微量加样枪、红血球计数板、记号笔、医用橡皮膏、移液枪
      (5)试剂:PBS、小牛血清、培养液、双抗(青霉素、链霉素)、胰蛋白酶(0.08%)
 
二、操作步骤
 
      (1)从液氮容器中取出冻存管,直接浸入37℃温水中,并不时摇动令其尽快融化。
      (2)从37℃水浴中取出冻存管,75%酒精消毒后,打开盖子,用吸管吸出细胞悬液,加到离心管中。PriCells 推荐 接种培养瓶, 37 ℃培养箱静置培养 。
      (3)离心,1000rpm,5min。PriCells推荐不离心 。
      (4)弃去上清液,加入含10%小牛血清培养液重悬细胞,计数,调整细胞密度,接种培养瓶,37℃培养箱静置培养。PriCells 推荐 小牛血清 浓度依据原代细胞种类 。
      (5)次日更换一次1/2培养液,继续培养。
 
 三、注意事项 
 
      (1)将冻存管从液氮容器中取出时,要做好防护工作,以免冻伤。
      (2)取出冻存管后立即放入水浴中,使其尽快融化(在1-2分钟内)。
      (3)复苏用新配制的培养液。
 

相关产品

猜你喜欢

当前客户在线交流已关闭
请电话联系他 :