ELISA试剂盒实验质量控制

到70年代，实验室质量控制进入一个新的阶段--全面质量治理，推行Good Laboratory Parctice（简称GLP）。从1949年美国College of American Pathologists（简称CAP）首先开始研究临床实验室室内质量控制（简称质控）问题，美国学者Levery和Jenning于1950年发表*篇关于使用质控图的实验室室内质控，临床检修实验室的室内质控工作正式拉序幕。全面质量治理的宗旨在于预防差错的产生，质控图的统计学质控的目的是检出差错，统计学的实验室室内质控是全面质量治理中的一个重要环节。卫生部临床检修*免疫质控室从1988年开始在全国范围内开展乙肝标志物检修的质量评价流动，一直采用这一套质量评价方法，并在实践中不断实践、进步和完善，但愿能找出一条适合中国国情的，行之有效的质量治理的道路。由于ELISA是目前临床上zui常用的一种免疫学检修方法，就以ELISA试剂盒检修为例，讨论下问题。

一、质量控制（Quaility Control,Q.C）
质量控制是监视全过程，排除误差，防止变化，维持标准化现状的一个管理过程。这一过程是通过一个反馈环路进行的。
（1）确定控制的对象；
（2）规定控制对象的标准（预期值）；
（3）制定或选择控制方法和手段；
（4）测量实际数据；
（5）比较或较对实际数据与预期值之间的差异，并说明产生这一差异的原因。超出预定误差范围，报警系发出信号，反馈通道中断。
（6）采取行动，解决差异。恢复原状（原标准状态）的手段发挥作用。质量控制主要采用质控图进行。质控图是把某一检验的性能数据与所计算出来的预期的"控制限"进行比较的图。这种性能数据是在按规程正常进行时，按时间顺序而抽选出来的，其目的是检测检验过程中变异的"可追查"性原因。"可追逆"性的误差原因，是指除去随机误差以外的其他原因。"控制限"是通过统计计算出来的。 
二、误差
实验误差分为三种：系统误差、随机误差和过失误差。系统误差是指一系列测定结果与真值或靶值存在有同一倾向的误差，有明显的规律性，ELISA试剂盒可在一定条件下重复出现，是可以通过质控预防和校正的。随机误差又称偶然误差，是一种偶然的、未能预料到的误差，是难以避免和校正的误差。检验工作中随机误差的分布符合正态分布规律。过失误差是人为的责任误差。通过加强实验室管理和开展质量控制工作是可以避免的。
三、正态分布及标准差
ELISA试验中，检验同一样本达20次以上时，就会发现这组数据（指测定结果的吸光值）分布在均值两侧，大部分集中在均值附近。如果以测定值为横坐标，以出现的频率为纵坐标作图，就可绘出一个呈钟形的曲线图。钟顶处为均值，其他值以均值为中心对称分布，这就是正态分布。正态曲线以下的面积称概率，常用样本的均数（X）和标准差（SD）来表示，其计算方法如下：均值、标准差和概率的关系如下：
 X±1SD，概率0.68 X±2SD，概率0.95 X±3SD，概率0.99换言之，当ELSIA检测同一样本达一定次数后所得的一组数据，其中靠近均值（X）的±1SD范围内的数据，ELISA试剂盒占该组数据的68%，在X±2SD范围内分布的数据占总体的95%，在X±3SD范围内分布的数据占总体的99%。当我们要求检验结果在X±2SD范围内为合格时，将有95%的数据可能合格。
四、质控图 
通过以上三步骤，可以开始作室内质控图，根据RCVK的和SD作质控框图。利用质控图可以对每次检验的结果进行监测，当没有更换另一批号试剂盒和另一批号质控血清时，该质控图可以连续作下去。  
质控血清的S/CO值低于-2SD的范围,属"告警"，应寻找原因并在质控图上记录查出的原因。 
ELISA试剂盒试验中，各种检验项目的误差允许范围均有待在实践中得出结论，以上只是举例说明质控方法，不是定论。2SD是一般*的允许误差限度。每批测定放一份质控血清时，一次超过2SD应作为"告警"，二次超出2SD为"失控"。当质控过程中，出现失控时，出现失控时，应查找原因，通常是试剂盒或质控血清失效造成。更换试剂盒或更换质控血清，找出原因纠正后重新检验。如果检验结果仍达不到要求或找不到原 因时，应重复进行OCV的检验。如果OCV检验的结果仍是好的，说明常规操作出现问题。 
一般认为：①一次超出3SD；②连续二次超出2SD；③3-5次连续处于一侧的2SD之内；④5～7次连续偏向横轴的一侧，均为失控。 
第③、④种情况，单独依靠记录往往是不易察觉的，但在质控图上可以清晰地发现这种失控。
五、ELISA试剂盒室间质评的方法
A、 发质控物进行调查 
这是国内外室间质评的常用形式。部临检中心对乙肝标志物ELISA检验的室间质评采用定期发放质控物至各实验室，各实验室在规定的日期进行检验，并将检验结果报至部临检中心。部临检中心经统计分析，将评价结果寄回各实验室。通过评价，各实验室了解本室工作质量，发现差距，并设法改进，以不断提高检验质量。 
这种评价方式有一定缺点，即各实验室常对质控物特殊对待，在检验时选用特殊试剂盒，选派特别的技术员进行检验，有的实验室互相和对结果并作修改。这就使EQA的结果不能反映该实验室日常工作水平。
B、 派观察员到实验室进行试剂调查 
这种调查事先不通知，临时派观察员到实验室，采用常规方法，检验规定的一组标本，进行评价。 
这种调查方式，容易发现该实验室存在的实际问题，可以直接给予指导和帮助，解决问题，提高检验质量。这种调查通常可以使用真实样本，避免采用质控物的一些缺点。