酒中氨基甲酸乙酯的测定

方法一、GC-MS 法 参照GB 5009.223-2014

摘要：本文参照食品安全国家标准方法《GB 5009.223-2014 食品中氨基甲酸乙酯的测定》 ，进行了白酒中氨基甲酸乙酯含量的测定。采用商品化Cleanert EC氨基甲酸乙酯固相萃取柱（碱性硅藻土）进行样品前处理，GC-MS法测定，结果表明氨基甲酸乙酯检出限为2.0μg/kg，定量限为5.0 μg / kg（取样2.00g），回收率在98.3%～104.5%；白酒样品的日间精密度测试，RSD<3%。方法简单，产品稳定，结果准确灵敏，*分析检测的要求。

       氨基甲酸乙酯(Ethyl Carbamate, EC)，是一种致癌物，可以引起肺肿瘤、淋巴癌、肝癌、皮肤癌等。它是发酵食物和酒*品在发酵或贮存过程中天然产生的污染物。2007年，世界卫生组织的癌症研究机构( IARC) 正式将氨基甲酸乙酯( Ethyl Carbamate) 归为2A类致癌物。因此对相关食品中进行氨基甲酸乙酯的检测和监测是非常必要的。

一、试剂和材料

标准溶液配制

       1.0 mg/mL D5-氨基甲酸乙酯贮备液：准确称取10.0 mg D5-氨基甲酸乙酯标准品，用甲醇定容至10 mL。

       2.0 μg/mL D5-氨基甲酸乙酯使用液：准确吸取1.0 mg/mL D5-氨基甲酸乙酯标准贮备液0.1 mL，用甲醇定容至50 mL。

       1.0 mg/mL氨基甲酸乙酯贮备液：准确称取0.5000 g氨基甲酸乙酯标准品，用甲醇定容至50 mL。 

       分别准确吸取一定量氨基甲酸乙酯标准，加100 μL  2.0 μg/mL的D5-氨基甲酸乙酯溶液，用甲醇定容至1.0 mL，得到10.0、25.0、50.0、100.0、200.0、400.0、1000.0 ng/mL的标准使用液（内含200.0 ng/mL D5-氨基甲酸乙酯）

固相萃取柱：Cleanert EC氨基甲酸乙酯固相萃取柱（碱性硅藻土）

气相色谱柱：DA-INNOWAX柱

二、实验方法

样品前处理

   准确量取 2.00 ml 酒样，加 100 μL  2.0 μg/ mL D5-氨基甲酸乙酯内标使用液、氯化钠 0.3 g（白酒、酱油不加），超声溶解、混匀，然后加样到氨基甲酸乙酯柱上，让试样慢慢渗入到Cleanert EC氨基甲酸乙酯固相萃取柱中，静置约 10 min，先用 10 mL 正己烷淋洗除杂，然后用 10 mL 5%乙酸乙酯/乙mi溶液以1 mL/min 流速洗脱并收集于10 mL 具塞刻度试管中，在室温下用氮气缓缓吹至0.5mL 左右，用甲醇定容至1.0 mL 制成测定液供GC/MS分析，同时做空白。

GC-MS条件

       色谱柱：DA-INNOWAX气相柱，30 m*0.25 mm*0.25 μm；

       进样口温度：220℃；柱温：初温 50℃，保持 1 min，然后以 8℃ / min 升至 180，然后以 15℃/ min 升至 210℃ 保持5 min；

       载气：氦气，纯度≥99.999％

       流速：1 mL/min；

       电离方式：EI源。

       离子源温度：230℃；

       进样方式：不分流进样；

       样量：1-2μL；

       氨基甲酸乙酯选择监测离子（m/z）： 62、76、89；定量离子62；

       D5-氨基甲酸乙酯选择监测离子（m/z）64、76；定量离子64

三、实验结果

色谱图

图1 氨基甲酸乙酯及内标总离子图

图2 氨基甲酸乙酯质谱图

3 内标 D5-氨基甲酸乙酯质谱图

标准曲线

酒样加标的回收率及精密度

表1 白酒样品加标的回收率及精密度

表2 白酒样品日间精密度

注：相同的样品，，每天测定2次，连续7天内测定数据

方法检出限

   当试样取2.00g时，本方法氨基甲酸乙酯检出限为2.0μg/kg，定量限为5.0μg/kg。

四、结论

  本文采用商品化Cleanert EC氨基甲酸乙酯固相柱（碱性硅藻土）前处理结合DA-INNOWAX气相柱进行白酒中氨基甲酸乙酯的测定，结果表明氨基甲酸乙酯检出限为2.0 μg/kg，回收率在98.3% ～ 104.5%，*食品安全国家标准GB5009.223-2014方法的检测要求。

五、订货信息

方法二、液相方法-荧光检测法

一、原理

在盐酸中，氨基甲酸乙酯与9-羟基吨反应，生成具有荧光特性的衍生物，经色谱柱分离，荧光检测器检测，外标法定量

二、衍生方法

量取0.02mol/L的9-羟基吨500μL添加到1ml酒精度调整至40%的样品或标样中，然后加入100μL的1.5mol/L HCl中，混匀使反应*，放暗处衍生至少60min，过0.45μm滤膜，待测。

三、样品前处理方法：同上

四、色谱条件

       色谱柱：Venusil MP C18，4.6 mm*250 mm，5 μm（P/N：VA952505-0）

       流速：0.8 mL/min

       柱温：30℃

       激发波长：233 nm

       发射波长：600 nm

       流动相：A：0.02M乙酸钠（pH=7.2），B：乙腈，梯度程序如下

注意事项：

1. 衍生试剂配置完成后，应4℃避光保存（有效期1个月）

2. 在加样时，尽量缩短操作时间，避免衍生试剂见光时间过长分解

3. 该衍生反应需要在暗处进行

4. 衍生时间不得少于30min

5. 流动相pH值要调整准确

    

   五、订货信息