济南赛畅科学仪器有限公司 >> 进入商铺
2015/7/5 16:21:25方法一、GC-MS 法 参照GB 5009.223-2014
摘要:本文参照食品安全国家标准方法《GB 5009.223-2014 食品中氨基甲酸乙酯的测定》 ,进行了白酒中氨基甲酸乙酯含量的测定。采用商品化Cleanert EC氨基甲酸乙酯固相萃取柱(碱性硅藻土)进行样品前处理,GC-MS法测定,结果表明氨基甲酸乙酯检出限为2.0μg/kg,定量限为5.0 μg / kg(取样2.00g),回收率在98.3%~104.5%;白酒样品的日间精密度测试,RSD<3%。方法简单,产品稳定,结果准确灵敏,*分析检测的要求。
氨基甲酸乙酯(Ethyl Carbamate, EC),是一种致癌物,可以引起肺肿瘤、淋巴癌、肝癌、皮肤癌等。它是发酵食物和酒*品在发酵或贮存过程中天然产生的污染物。2007年,世界卫生组织的癌症研究机构( IARC) 正式将氨基甲酸乙酯( Ethyl Carbamate) 归为2A类致癌物。因此对相关食品中进行氨基甲酸乙酯的检测和监测是非常必要的。
一、试剂和材料
标准溶液配制
1.0 mg/mL D5-氨基甲酸乙酯贮备液:准确称取10.0 mg D5-氨基甲酸乙酯标准品,用甲醇定容至10 mL。
2.0 μg/mL D5-氨基甲酸乙酯使用液:准确吸取1.0 mg/mL D5-氨基甲酸乙酯标准贮备液0.1 mL,用甲醇定容至50 mL。
1.0 mg/mL氨基甲酸乙酯贮备液:准确称取0.5000 g氨基甲酸乙酯标准品,用甲醇定容至50 mL。
分别准确吸取一定量氨基甲酸乙酯标准,加100 μL 2.0 μg/mL的D5-氨基甲酸乙酯溶液,用甲醇定容至1.0 mL,得到10.0、25.0、50.0、100.0、200.0、400.0、1000.0 ng/mL的标准使用液(内含200.0 ng/mL D5-氨基甲酸乙酯)
固相萃取柱:Cleanert EC氨基甲酸乙酯固相萃取柱(碱性硅藻土)
气相色谱柱:DA-INNOWAX柱
二、实验方法
样品前处理
准确量取 2.00 ml 酒样,加 100 μL 2.0 μg/ mL D5-氨基甲酸乙酯内标使用液、氯化钠 0.3 g(白酒、酱油不加),超声溶解、混匀,然后加样到氨基甲酸乙酯柱上,让试样慢慢渗入到Cleanert EC氨基甲酸乙酯固相萃取柱中,静置约 10 min,先用 10 mL 正己烷淋洗除杂,然后用 10 mL 5%乙酸乙酯/乙mi溶液以1 mL/min 流速洗脱并收集于10 mL 具塞刻度试管中,在室温下用氮气缓缓吹至0.5mL 左右,用甲醇定容至1.0 mL 制成测定液供GC/MS分析,同时做空白。
GC-MS条件
色谱柱:DA-INNOWAX气相柱,30 m*0.25 mm*0.25 μm;
进样口温度:220℃;柱温:初温 50℃,保持 1 min,然后以 8℃ / min 升至 180,然后以 15℃/ min 升至 210℃ 保持5 min;
载气:氦气,纯度≥99.999%
流速:1 mL/min;
电离方式:EI源。
离子源温度:230℃;
进样方式:不分流进样;
样量:1-2μL;
氨基甲酸乙酯选择监测离子(m/z): 62、76、89;定量离子62;
D5-氨基甲酸乙酯选择监测离子(m/z)64、76;定量离子64
三、实验结果
色谱图
图1 氨基甲酸乙酯及内标总离子图
图2 氨基甲酸乙酯质谱图
3 内标 D5-氨基甲酸乙酯质谱图
标准曲线
酒样加标的回收率及精密度
表1 白酒样品加标的回收率及精密度
序号 | 白酒样品 (mg/L) | 加标量(mg/L) | 测定浓度(mg/L) | 回收量(mg/L) | 回收率(%) | 平均回收率 (%) | RSD % |
1 |
73.86
| 100 | 178.32 | 104.46 | 104.5 |
101.4 | 2.51 |
2 | 100 | 176.78 | 102.92 | 102.9 | |||
3 | 100 | 175.64 | 101.78 | 101.8 | |||
4 | 100 | 173.25 | 99.39 | 99.4 | |||
5 | 100 | 172.20 | 98.34 | 98.3 |
表2 白酒样品日间精密度
测定数据(mg/L) | 平均值 | RSD% | ||||||
60.47 | 60.79 | 59.05 | 63.04 | 58.15 | 56.61 | 59.03 | 59.13 | 2.94 |
58.99 | 59.75 | 60.24 | 57.49 | 59.77 | 56.91 | 57.60 |
注:相同的样品,,每天测定2次,连续7天内测定数据
方法检出限
当试样取2.00g时,本方法氨基甲酸乙酯检出限为2.0μg/kg,定量限为5.0μg/kg。
四、结论
本文采用商品化Cleanert EC氨基甲酸乙酯固相柱(碱性硅藻土)前处理结合DA-INNOWAX气相柱进行白酒中氨基甲酸乙酯的测定,结果表明氨基甲酸乙酯检出限为2.0 μg/kg,回收率在98.3% ~ 104.5%,*食品安全国家标准GB5009.223-2014方法的检测要求。
五、订货信息
产品名称 | 规格包装 | 订货号 |
Cleanert EC (氨基甲酸乙酯 固相萃取柱) | 20支/包 | GB50092232014 |
DA-INNOWAX气相柱 | 30 m×0.25 mm×0.25 μm | 2025-3002 |
Qudura 卓睿全自动固相萃取仪 | 4通道,可连续处理24个样品 | SPE-40 |
甲醇 | 4×4L/箱 | AH230-4 |
正己烷 | 4×4L/箱 | AH216-4 |
乙酸乙酯 | 4×4L/箱 | AH100-4 |
1.5mL样品瓶 | 1.5 mL | 1109-0519 |
1.5mL样品瓶 | 与1.5 mL样品瓶瓶套 | 0915-1819 |
PTFE滤膜 | 0.22 μm,直径13 mm;200个/pk | AS041320 |
方法二、液相方法-荧光检测法
一、原理
在盐酸中,氨基甲酸乙酯与9-羟基吨反应,生成具有荧光特性的衍生物,经色谱柱分离,荧光检测器检测,外标法定量
二、衍生方法
量取0.02mol/L的9-羟基吨500μL添加到1ml酒精度调整至40%的样品或标样中,然后加入100μL的1.5mol/L HCl中,混匀使反应*,放暗处衍生至少60min,过0.45μm滤膜,待测。
三、样品前处理方法:同上
四、色谱条件
色谱柱:Venusil MP C18,4.6 mm*250 mm,5 μm(P/N:VA952505-0)
流速:0.8 mL/min
柱温:30℃
激发波长:233 nm
发射波长:600 nm
流动相:A:0.02M乙酸钠(pH=7.2),B:乙腈,梯度程序如下
时间(min) | A% | B% |
0 | 70 | 30 |
5 | 50 | 50 |
25 | 25 | 75 |
26 | 10 | 90 |
29 | 10 | 90 |
30 | 70 | 30 |
38 | 70 | 30 |
注意事项:
衍生试剂配置完成后,应4℃避光保存(有效期1个月)
在加样时,尽量缩短操作时间,避免衍生试剂见光时间过长分解
该衍生反应需要在暗处进行
衍生时间不得少于30min
流动相pH值要调整准确
五、订货信息
产品名称 | 规格包装 | 订货号 |
Cleanert EC (氨基甲酸乙酯固相萃取柱) | 20支/包 | GB50092232014 |
Venusil MP C18色谱柱 | 4.6 mm*250 mm,5 μm | VA952505 |
Qudura 卓睿全自动固相萃取仪 | 4通道,可连续处理24个样品 | SPE-40 |
甲醇 | 4×4L/箱 | AH230-4 |
正己烷 | 4×4L/箱 | AH216-4 |
乙酸乙酯 | 4×4L/箱 | AH100-4 |
1.5mL样品瓶 | 1.5mL | 1109-0519 |
1.5mL样品瓶 | 与1.5mL样品瓶瓶套 | 0915-1819 |
PTFE滤膜 | 0.22μm,直径13mm;200个/pk | AS041320 |