技术文章

一、匀浆介质的制备:

一般采用pH 7.4, 0.01mol/L Tris-HCl, 1mmol/L EDTA-2Na, 0.01mol/L蔗糖,0.8%氯化钠溶液或直接用0.86%的生理盐水作为匀浆介质。

二、组织匀浆的制备

1、取组织块（0.1g～0.2g）zui少可到2～5mg在冰冷的生理盐水中漂洗，除去血液，滤纸拭干，准确称重，放入5ml的匀浆管中。

2、按重量(g):体积(ml)=1:9的比例加入9倍体积的匀浆介质（pH7.4， 0.01mol/L Tris-HCl，1mmol/L EDTA-2Na ,0.01mol/L蔗糖,0.8%的氯化钠溶液）或者0.86%的生理盐水于匀浆管中，冰水浴条件下,用眼科小剪尽快剪碎组织块。

3、匀浆的方式有多种：手工匀浆，机器匀浆，超声粉碎。

① 手工匀浆：左手持匀浆管将下端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手将捣杆垂直插入套管中，上下转动研磨数十次（6～8分钟），充分研碎，制成10%的匀浆液。

② 机器匀浆：用组织捣碎机10000～15000 转/分 上下研磨制成10%组织匀浆，也可用内切式组织匀浆机制备（匀浆时间10秒/次，间隙30秒，连续3～5次，在冰水中进行），皮肤、肌肉组织等可延长匀浆时间。

③ 超声粉碎：用超声粉碎机进行粉碎，可用Soniprep150型超声波发生器以振幅14微米超声处理30秒使细胞破碎，也可用国产超声波发生仪，用400安培，5秒/次，间隙10秒反复3～5次。

        镜检观察:取少量组织匀浆作涂片（直接涂片、染色均可以），显微镜下观察细胞是否破碎，若没有则可延长匀浆时间。

4、将制备好的10%匀浆液用普通离心机或低温低速离心机2500转/分左右,离心10～15分钟，取上清液进行测定.

三、样本保存:

        动物组织样本暂时不测定，可立即低温冻存，温度越低越好，中间如*冻融，-20℃以下可保存三个月,-70℃以下可保存六个月。

        制备好的匀浆液建议不要冻存,当天进行测定,如放置时间过长相关酶活会有所下降,部分指标4℃可存放3～5天(如SOD要存放2～3天,MDA可存放3～5,总蛋白测定可存5～7天等)

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