鱼外周血液淋巴细胞分离和观察试验方案

鱼外周血液淋巴细胞分离和观察试验方案

试验动物：鲫鱼

试剂：5％枸橼酸钠溶液、Hank’S液、吉姆萨瑞士染色液、人淋巴细胞分离液

一、 采血

通过尾静脉采血5 mL，添加0.5 mL 5％枸橼酸钠溶液抗凝剂.

二、外周血淋巴细胞的分离和纯化

取抗凝血2mL与Hank’S液1：1(也有2:1的比例)稀释混匀后，以2 mL/管的量分别置于玻璃离心管中，用移液枪吸取稀释血液2 mL或4ml，沿管壁缓缓的叠加到2ml人淋巴细胞分离液界面上，注意不要破坏分离液界面，以2 000 r／min离心35 min后吸取淋巴细胞层。

三、淋巴细胞吉姆萨瑞士(Giemsa)染

1、取涂片、自然干燥。

2、滴加瑞氏-姬姆萨染液2-3滴覆盖整个标本涂片，染1-2分钟。

3、滴加等量PH6.4的磷酸盐缓冲液(或等量超纯水)，轻轻晃动玻片, 与瑞氏-姬姆萨染色液充分混匀，染色3-5分钟。

4、水洗、吸干、镜检。

5、染色后胞浆和胞核的染色清晰分明，细胞核着色呈深浅不同的紫红色，胞浆呈浅红色，胞浆中颗粒区分明显。