一、 HRP 辣根过氧化酶是常见的酶促发光或显色的交联酶，由于HRP比活高、特异性更强、分子量小（40kD）、稳定性好和作用底物范围广的优点而得到广泛使用。HRP的底物种类有不少，主要可以分为化学发光底物和生色底物2大类:
1. 化学发光底物：
化学发光底物主要考虑的是：发光信号强弱——发光信号当然越强越好，强发光信号持续的时间也是越长越好，还有就是背景低灵敏度高。
原理：试剂中的发光物在辣根过氧化物酶的作用下发生氧化降解，并发射波长为428nm的光，此光可经x光胶片(放射自显影片)感光记录下来。
常用的化学发光底物有ECL，在ECL底物中，含有H2O2和鲁米诺，在HRP的作用下，发出荧光来。
索莱宝ECL Plus
产品简介:索莱宝ECL Plus荧光检测试剂采用*的发光底物系统，具有灵敏度和高信噪比，可检测出10-100 fg的微量抗原，检测灵敏度高出普通ECL产品100倍以上；同时该试剂极其节省抗体(一抗1:2000-1:6000，二抗1:4000-1:10000)，产生的非特异背景非常低。发光迅速，荧光可使X感光胶片感光达12小时以上，特别适用于痕量蛋白或核酸检测。
产品组成：以100ml规格为例，含50 ml 溶液A和50 ml 溶液B。根据用量，使用前混合。用途：用于HRP标记抗体的Western Blot和HRP标记探针的核酸杂交。
安全性：无特殊毒性，按普通化学品处理。
产品储存：4 ºC避光储存1年。25 ºC室温放置数周不影响质量。
同时索莱宝还拥有多种ECL化学发光检测试剂盒，更大程度的方便了客户的实验过程。
索莱宝ECL化学发光试剂盒
产品内容：
1. 封闭试剂： 30g(可配制 400ml)。
2. 10 倍浓缩抗体稀释液50ml。
3. HRP 标记二抗0.3ml，效价 1： 500-1000。
4. ECL 显色液，25mlA+25mlB。
产品保存：-20℃避光密闭保存，一年有效。若经常使用，可将封闭试剂，抗体稀释液和 ECL 显色液存放于 2-8℃以方便使用。
HRP的生色底物显色有DAB， AEC和TMB等（而得到可溶性产物的底物如OPD，ABTS等则适用于ELISA）中，与化学发光法中的酶促基团发光不同，底物显色主要是利用底物在有HRP和过氧化氢的存在下失去电子而呈现出颜色变化积累，这一过程检测WB的结果。
HRP的催化反应需要底物过氧化氢(H2O2)和供氢体(DH2)。供氢体多为无色的还原型染料，通过反应可生成有色的氧化型染料(D)。酶促反应的过程如下:
HRP
DH2＋H2O2────→D＋2H2O
供氢体的种类很多，形成的产物特点不一。
DAB(3.3－二氨基联苯胺)的反应产物为不溶性沉淀物，并有电子密度，故适宜于做免疫酶染色或电镜观察。DAB可以和HRP作用形成褐色不溶性产物，灵敏度高，特异性好，缺点就是需要现配现用，显色后光照数小时会褪色，不能*保存，需要拍照记录，而且有毒。
目前用得较广泛和较满意的供氢体是：OPD(邻苯二胺)和TMB(四甲基联苯胺)。前者形成的产物为深桔黄色或棕色，后者产物为蓝绿色，二者的可溶性均好，在避光处颜色稳定，空白可近于无色。
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TMB双组分是将A、B液分开放置，现用现混；TMB单组分则将A、B液预先混合在一起，直接使用。其TMB双组分显色液有50*2、100*2、250*2、500*2四个规格，可根据不同实验的需求选择不同规格产品。
另外，还有一种供氢体称ABTS[2, 2'-边氮基-双(3-乙基苯并噻吡咯啉-6磺酸)]，其反应产物呈蓝绿色，且灵敏度和稳定性均好。尤其是在致癌的潜在可能性方面，ABTS与TMB因致癌可能性较小，因此皆是值得被优选的供氢体。
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碱性磷酸酶AP：
Western Blot检测系统中常用交联酶两大家族中的另外一类就是AP——碱性磷酸酶。由于AP实验经常会遇到膜上显色背景偏高的问题，所以就WesternBlot本身来说偏爱HRP的要比AP多。AP显色底物生成的产物主要是蓝紫色，成像性好，容易拍照。早些年前，AP检测的灵敏度比HRP高，整个显色过程更有“技术性”，有许多个人技巧在里面，让人取舍两难。如今由于HRP的化学发光底物已经不断改进而使得灵敏度不断提高，化学发光显色上HRP和AP不相上下，但是生色反应来说，AP显色的灵敏度还是比一般的HRP显色底物要高。
AP常用的检测底物常用的是BCIP ，NBT 和INT。为了达到更好的效果我们经常会将其结合使用
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