标题名称：MHCC-97H MHCC-97H细胞 细胞株培养
细胞名称 | MHCC-97H人高转移肝癌细胞 |
种属 | 人 |
组织来源 | 肝 |
生长状态 | 贴壁生长 |
细胞形态 | 上皮样 |
培养条件 | 培养基类型：DMEM（Hyclone SH30243.01)培养基 FBS（德国SERANAS-FBS-SA-015): 10% 抗生素：双抗 培养条件：37℃，CO2: 5% |
传代方法 | 收到细胞后，在倒置显微镜下观察细胞生长状态： 如果没长满，将培养瓶用75%酒精消毒后在超净台内更换新鲜培养液，继续培养。 如果细胞已经长满（约80%-90%）则传代后继续培养。 贴壁细胞传代方法： 1 弃去培养基，用不含钙、镁离子的PBS洗1-2次。 2 加1ml 0.25%的胰酶（含0.02%EDTA），让胰酶与大部分细胞接触后放入37℃培养箱内，随时观察细胞状态变化，待细胞大部分变圆后加*培养基终止消化。 悬浮细胞传代方法：可以直接传代也可以离心法传代。 1 直接传代是让悬浮细胞慢慢沉淀在瓶底后，将上清吸掉1/2-2/3，吹打细胞形成细胞悬液后，分别接种到其他培养皿或培养瓶中继续培养。 2离心法传代是将细胞连同培养液一并转移到离心管内， 1000rpm，5分钟，去除上清，加新的培养液到离心管内，吹打细胞形成细胞悬液后，分别接种到其他培养皿或培养瓶中继续培养。 一般没有特殊说明，细胞一般是一传二。 |
冻存方法 | 70% *培养基，20%FBS，10%DMSO，现用现配。 储存：液氮中长期保存。 |
注 | 1 观察细胞在低倍镜下观察，便于整体估计细胞密度。 2 在运输过程中可能会导致一些贴壁不牢的细胞发生部分脱落，可离心吹打后重新种入瓶中培养。 3 收到细胞后若发现培养瓶破损、细胞污染等，请拍照并在三天内与我们。 |
注意：我公司所用德国SERANAS-FBS-SA-015南美血清，细胞长势很好，凡购买我公司MHCC-97H，我公司赠送20-50ML试用装一瓶。
当您收到正确产品时，需要计数细胞以确定其数量和活性。
这一步骤非常重要，能确定您收到的产品是否合格
1. 在生物安全柜（超净工作台）中，将细胞混匀。细胞在1.5ml和2ml试管中的，请选用1000μl的枪头混匀；在5ml，15ml或50ml的试管中的，请选用5ml的移液管混匀。
2. 从试管中取10μl细胞样品，和10μl胎盘兰混匀后；加入细胞计数板中，进行细胞计数。
选取正确的稀释倍数，对正确计算细胞数量和细胞活性是非常重要的
试管规格 | 细胞量 | 细胞取样 | 0.4%台盘兰 | PBS（1×） | 稀释倍数 |
1.5ml | 0.5-1×106 | 10μl | 10μl | - | 2 |
2ml | 0.5-1×106 | 10μl | 10μl | - | 2 |
5ml | 5×106 | 10μl | 10μl | - | 2 |
15ml | 10×106 | 10μl | 10μl | - | 2 |
15ml | 15-20×106 | 10μl | 10μl | 80μl | 10 |
50ml | 30-100×106 | 10μl | 10μl | 80μl | 10 |
N = 细胞计数板上四个大格的细胞量
D = 稀释倍数
细胞数量和活性计算公式：
细胞数量 = N/4×D×＿ml = ＿ × 104
细胞活性 = 没有染上台盼兰的细胞/全部的细胞×100%
如果你计数的细胞明显少于我们声称的细胞数，请按以下步骤操作：
（1） 检查细胞悬液中是不是有细胞团。
如果有的话，请用1000μl的枪头轻轻吹打混匀后，再次取样计数。
（2） *的细胞浓度是在计数板中的每个大格里有50-100个细胞（总数200-400）。
如果不是，请做适当的浓度稀释后，再计数一次。
（3） 请立即与我们。
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