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2016/4/26 15:42:29IPTG是一种作用*的诱导剂,不被细菌代谢而十分稳定,因此被实验室广泛应用。IPTG溶液的配制很简单:在8ml蒸馏水中溶解2g IPTG后,用蒸馏水定容10ml,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成1ml小份贮存于-20℃。
IPTG的使用方法:
先把IPTG配制成24mg/ml(100mM)的水溶液,并进行过滤除菌后保存。然后在100ml的琼脂培养基中,加入100μl的上述溶液、200μl的X-Gal(20?mg/ml的二甲基甲酰胺(DMF)溶液)和100μl的Amp(100mg/ml),制作成IPTG、X-Gal、Amp平板培养基。当DNA片段插入pUC系列载体(或其他带有lacZ、Amp基因载体),然后转化lacZ缺失细胞中后,涂布上述的IPTG、X–Gal、Amp平板培养基,可根据长出菌体的蓝白色,而方便地挑选出基因重组体(白色为具有DNA插入片段的基因重组体)。
选用IPTG作诱导物的原因
能诱导酶的合成,但又不被分解的分子,称为安慰诱导物(gratuitousinducer)。?由于乳糖虽可诱导酶的合成,但又随之分解,产生很多复杂的动力学问题,因此人们常用安慰诱导物来进行各种实验。X-gal(5-溴-4-录-3-吲哚-β-半乳糖苷)也是一种人工化学合成的半乳糖苷,可被β-半乳糖苷酶水解产生兰色化合物,因此可以用作β-半乳糖苷酶活性的指示剂。IPTG和X-gal都被广泛应用在分子生物学和基因工程的工作中。
某些诱导物与自然的β-半乳糖苷酶相似,且不能?被酶分解,比如异丙基-β-D-硫代半乳糖苷,(isopropylthiogalactoside,IPTG)。不被细菌分不被细菌分解性质稳定,解性质稳定,它的浓度在实验中不会改变。复杂的动力学问题,便于研究。IPTG能在缺乏lacY基因下而有效地被运送。半乳糖苷键中用硫代替了氧,失去了水解活性,半乳糖苷键中用硫代替了氧失去了水解活性,但硫代半乳糖苷和同源的氧代化合物与酶位点的亲和力相同,虽不为β-半乳糖苷酶所识的亲和力相同,IPTG虽不为半乳糖苷酶所识虽不为但它是lac基因簇十分有效的诱导物
基因簇十分有效的诱导物。但它是基因簇十分有效的诱导物。
IPTG是β–半乳糖苷酶的活性诱导物质。基于这个特性,当pUC系列的载体DNA(或其他带有lacZ 基因载体DNA)以lacZ 缺失细胞为宿主进行转化时、或用M13噬菌体的载体DNA进行转染时。