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BC2245-100T/96S 果糖-1,6-二磷酸含量检测试剂盒 微量法
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- BC2245-100T/96S
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北京索莱宝科技有限公司
（Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd. ）是一家从事生物学试剂及试剂盒的高科技生物企业。
总部位于北京，并在设有经销或代理机构。产品因可靠而稳定的质量和较为完善的售后服务确立了“Solarbio”良好的品牌形象。公司秉承“以客户为中心、以产品为保障、以诚信为基础、以创新为宗旨”的发展理念，拥有专业的研发和质量检测团队以及的仓储和物流系统。“Solarbio”已经得到科研工作者的认可，成为广大经销商推崇的。
公司拥有一批专业的研发人员，我们专注于生物产品的不断完善和创新。产品覆盖面广，品质可靠。先后开发了涵盖分子生物学、细胞生物学、免疫学、生物医学等领域的多种试剂及试剂盒。同时，索莱宝公司提供各种常规生化试剂，库存常备产品多达10000多种，可随时为广大科研工作者提供各类专业试剂。在质量方面，索莱宝谨记公司信念：质量高于一切。所有研发的产品都设有严谨的生产流程，科学的质量检测方法和成熟的质量检测程序，我们恪守对每一位用户的承诺：用专业的态度做专业的品牌。同时，公司组建了一支专业的技术服务队伍，能够为科研工作者提供专业的技术服务。每一位购买索莱宝产品的用户都能够得到专业的咨询和完善的售后服务。
索莱宝公司坚持与接轨，注重和企业的合作与交流，并提供产品代理、市场咨询等多项服务。公司将一如既往与世界更多合作，不断为广大生物科研工作者提供更优质的产品和服务。公司理念：“为科研服务，为生命尽责”。一个人能够走多远，取决于与谁同行。索莱宝公司期待与各同行精诚合作。
索莱宝诚招生物试剂研发人员，期待与广大同行精诚合作，为广大科研工作者提供优质的产品，高效的物流以及专业的售后服务。索莱宝感谢所有朋友的支持与帮助，您的支持是我们前进的动力和保障。让我们携手同行，共同创造美好的明天。
详细信息
果糖-1,6-二磷酸（FDP）含量检测试剂盒说明书
微量法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC2245
规格：100T/96S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液一 | 液体60 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
提取液二 | 液体10 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂一 | 液体10 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂二 | 液体×2支 | 2-8℃保存 |
试剂三 | 液体7 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂四 | 2-8℃保存 | |
标准品 | 粉剂×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 试剂二：临用前取一支加入0.15 mL蒸馏水，充分溶解后待用，用不完的试剂-20℃分装保存4周，避免反复冻融；
2、 标准品：临用前加入1176 μL 蒸馏水充分溶解，配制成50 μmol/mL果糖-1,6-二磷酸标准溶液，2-8℃可以保存4周。
产品说明：
果糖1,6-二磷酸（fructose-1,6-diphosphate, FDP）是糖酵解过程中的一种重要的中间产物，对多种酶具有调节作用，具有改善细胞能量代谢、增加能量利用、抗心律失常及抗组织过氧化等作用，广泛应用于临床医药。
醛缩酶催化果糖1,6-二磷酸裂解，产物与2,4-二* 苯 肼在酸性介质中反应生成2,4-二*苯腙，在碱性溶液中呈红棕色，在540 nm处有特征吸收峰。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、低温台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、冰、蒸馏水和EP管。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
组织：按照质量（g）：提取液一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液一）加入提取液一，冰浴匀浆后于4℃，12000g离心10min，取0.8mL上清液，再缓慢加入0.15mL提取液二，缓慢吹打混匀至无气泡产生，4℃ 12000g离心10min后取上清待测。
细胞：按照细胞数量（104个）：提取液一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；于4℃，12000g离心10min，取0.8mL上清液，再缓慢加入0.15mL提取液二，缓慢吹打混匀至无气泡产生，4℃ 12000g离心10min后取上清待测。
血清（浆）等液体：取100μL液体加入1mL提取液一，4℃ 12000g离心10min，取0.8mL上清液，再缓慢加入0.15mL提取液二，缓慢吹打混匀至无气泡产生，4℃ 12000g离心10min后取上清待测。
注：提取液二需缓慢加入，加入后会产生大量气泡，建议使用2mL EP管进行操作。
二、测定步骤
1、 分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至540nm，分光光度计蒸馏水调零。
2、 将50µmol/mL的果糖-1,6-二磷酸标准液用蒸馏水倍比稀释为3.125、1.5625、0.78125、0.39、0.2、0.1 µmol/mL的标准溶液备用。
3、 标准品稀释表：
序号 | 稀释前浓度（μmol/mL） | 标准液体积（µL） | 蒸馏水体积（µL） | 稀释后浓度μmol/mL） |
1 | 50 | 30 | 930 | 1.5625 |
2 | 1.5625 | 200 | 200 | 0.78125 |
3 | 0.78125 | 200 | 200 | 0.39 |
4 | 0.39 | 200 | 200 | 0.2 |
5 | 0.2 | 200 | 200 | 0.1 |
实验中每个标准管需40µL标准溶液。
4、 样本测定：(在1.5 mL离心管或96孔板中操作)
试剂名称（µL） | 对照管 | 测定管 | 空白管 | 标准管 |
样本 | 20 | 20 | - | - |
蒸馏水 | - | - | 20 | - |
标准溶液 | - | - | - | 20 |
试剂一 | 44 | 40 | 44 | 40 |
试剂二 | - | 4 | - | 4 |
充分混匀，37℃准确反应2 h | ||||
试剂三 | 40 | 40 | 40 | 40 |
充分混匀，37℃准确反应20 min | ||||
试剂四 | 100 | 100 | 100 | 100 |
充分混匀，37℃准确反应10 min | ||||
于微量玻璃比色皿/96孔板中测定540nm处吸光值A，分别记为A对照管、A测定管、A空白管和A标准管。计算ΔA=A测定管-A对照管，ΔA标准=A标准管-A空白管。（空白管和标曲只需检测1-2次） | ||||
三、FDA含量计算
1、 标准曲线的绘制：
以各个标准溶液的浓度为x轴，其对应的ΔA标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y= kx+b，将ΔA带入方程得到x（µmol/mL）。
2、FDP含量的计算：
（1）按样本质量计算
FDP含量（µg/g 质量）=x×(V上清+V提取液二)×M÷(W×V上清÷V提取液一)=403.75x÷W
（2）按细胞数量计算
FDP含量（µg/104 cell）=x×(V上清+V提取液二)×M÷(V上清÷V提取液一×N)=403.75x÷N
（3）按液体体积计算
FDP含量（µg/mL）=x×（V上清+V提取液二）×M÷ [V液体×V上清÷（V提取液一+V液体）]=4441.25x
V上清：提取时上清液体积，0.8mL；V提取液二：提取液二的体积，0.15mL；V提取液一：提取液一的体积，1mL；W：样本质量，g；M：果糖-1,6-二磷酸分子质量，340；V液体：液体样本体积，0.1mL；N：细胞数量，以万计。
注意事项：
当ΔA测定大于0.5时，建议将样本用蒸馏水稀释后再进行测定，计算公式中乘以稀释倍数。
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