DAPI染DNA的原理简析

DAPI染DNA的原理简析

       DAPI 即4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole)，分子式为C16H15N5·2C3H6O3 ，分子量457.48。

DAPI是一种能够与DNA强力结合的荧光染料。它结合到双链DNA小沟的AT碱基对处，一个DAPI分子可以占据三个碱基对的位置。结合到双链DNA上DAPI分子的荧光强度提高大约20倍，常用与荧光显微镜观测，根据荧光的强度可以确定DNA的量。另外，因为DAPI可以透过完整的细胞膜，它可以用于活细胞和固定细胞的染色。

在荧光显微镜观察下，DAPI染剂是利用紫外光波长的光线激发。单独DAPI的大吸收波长为340nm，大发射波长为488nm；当DAPI与双链DNA结合时，大吸收波长为364nm，大发射波长为454nm（10 mM Tris pH7.0，100 mM NaCl，10 mM EDTA），其发散光的波长范围含盖了蓝色至青绿色。DAPI也可以和RNA结合，但产生的荧光强度只有与DNA结合的荧光强度的1/5，其发散光的波长范围约在500nm左右。

DAPI的配制及贮存

固体粉末：避光，2-8 ℃保存，3年没有问题。

贮存液：用无菌水配制成浓度1 mg/ml的贮存液，配好后用锡纸包起来，避光，可在-20 ℃下长期保存。（DAPI易溶于水，在PBS中溶解度不高）

使用浓度：贮存液用1xPBS稀释到终浓度100 ng/ml。

荧光封片液：0.5 mol/L碳酸盐缓冲液与甘油等体积混合，pH9.5

染色与观察：制好的玻片上滴加几滴DAPI染液，染色10分钟，流水冲去染液，滤纸吸除多余水分，加一滴荧光封片液，置于荧光显微镜下观察，激发波长360-400nm。

注意事项：DAPI可能具有致癌性，全部操作过程中必须带塑料或乳胶手套。